誘導(dǎo)成人成肌細胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)前體細胞及用于移植治療局灶性腦缺血的實驗研究.pdf

1、目的:探討成人成肌細胞在體外轉(zhuǎn)化為神經(jīng)前體細胞的可行性及成肌細胞來源的神經(jīng)前體細胞移植治療腦缺血的效果，為腦缺血的干細胞治療尋找新途徑。探討腦缺血后經(jīng)頸內(nèi)動脈移植成肌細胞來源的神經(jīng)前體細胞的可行性，為該細胞腦內(nèi)移植的方式探索新方法。 方法: 1.從成人顳肌培養(yǎng)成肌細胞，通過體外誘導(dǎo)使其向神經(jīng)前體細胞轉(zhuǎn)化，通過RT-PCR和免疫細胞化學(xué)染色技術(shù)檢測細胞誘導(dǎo)前后(巢蛋白，GFAP、NF68和Galc)的基因和蛋白表達情況，對

2、成肌細胞向神經(jīng)轉(zhuǎn)分化進行鑒定。 2.用光化學(xué)法制作大鼠局灶性腦缺血模型，將成肌細胞來源的神經(jīng)前體細胞移植到腦缺血大鼠的缺血灶附近大腦皮層。通過行為學(xué)評分試驗(平衡木試驗、感覺刺激試驗和肢體放置試驗)觀察神經(jīng)功能的變化；采用免疫組織化學(xué)染色的技術(shù)檢測移植細胞抗原標(biāo)志物(人核抗原、GFAP、MAP2和Galc)的表達，觀察移植細胞的存活、遷移和分化情況；采用HE染色結(jié)合圖像分析方法檢測腦梗死體積的變化。 3.經(jīng)短暫性腦缺血(

3、大腦中動脈缺血)大鼠的頸內(nèi)動脈注射成人成肌細胞及其來源的神經(jīng)前體細胞，觀察注射的細胞的存活、遷移和分化情況。 結(jié)果: 1.經(jīng)體外誘導(dǎo)，成人成肌細胞變?yōu)閼腋∩L的細胞球，免疫細胞化學(xué)染色見細胞球表達巢蛋白，5-溴脫氧尿嘧啶核苷摻入試驗陽性；細胞分化后表達NF68，GFAP和Galc。RT-PCR分析結(jié)果與免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果一致。 2.成人成肌細胞及其來源的神經(jīng)前體細胞移植后主要分布于大鼠腦梗死灶的附近，少量神經(jīng)前

4、體細胞見于腦梗死灶與細胞注射部位之間的胼胝體處。在腦梗死灶附近的神經(jīng)前體細胞中，部分同時表達MAP-2抗原和人核抗原，部分同時表達GFAP抗原和人核抗原。而在移植的成肌細胞中，未見到此情況。平衡木試驗、感覺刺激試驗和肢體放置試驗結(jié)果顯示，細胞移植2周后各組大鼠的神經(jīng)功能障礙均有改善，而接受成肌細胞來源神經(jīng)前體細胞移植的大鼠神經(jīng)功能改善優(yōu)于其它兩組，統(tǒng)計學(xué)分析顯示差異具有顯著性，其它兩組間無差異。各組大鼠腦梗死體積之間差異沒有顯著性。

5、 3.成人成肌細胞及其來源的神經(jīng)前體細胞均出現(xiàn)在腦缺血灶周圍的腦實質(zhì)內(nèi)，表達人核抗原。免疫熒光組織化學(xué)染色顯示移植的神經(jīng)前體細胞中，部分同時表達MAP-2抗原和人核抗原，部分同時表達GFAP抗原和人核抗原。 結(jié)論: (1)成人成肌細胞在體外一定的誘導(dǎo)條件下能夠轉(zhuǎn)化為神經(jīng)前體細胞，后者可以進行擴增培養(yǎng)，在體外能夠分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。 (2)成人成肌細胞來源的神經(jīng)前體細胞移植后可以在腦缺血灶