成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞及移植治療腦梗塞模型鼠的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞及移植治療腦梗塞模型鼠的研究姓名：姚曉黎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張成20040428成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞及移植治療腦梗塞模型鼠的研究中文■要關(guān)應(yīng)用MSC移植治療腦梗塞的報(bào)道極少，國(guó)內(nèi)未見報(bào)道。研究表明，MSC可分化為神經(jīng)細(xì)胞，這為腦梗塞治療研究帶來新的希望。但是，目前MSC體外定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的條件及機(jī)制不明，它在病變組織

2、中維持穩(wěn)定和參與修復(fù)的作用機(jī)理不清。有關(guān)MSC的標(biāo)記、移植途徑以及移植后處理等問題亟需作進(jìn)一步研究。本研究將在體外建立成人MSC的培養(yǎng)體系，包括MSC的分離、純化、鑒定與擴(kuò)增。采用中藥參芪液等不同的方法體外誘導(dǎo)成人MSC分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，延長(zhǎng)神經(jīng)元樣細(xì)胞的存活時(shí)間；觀察誘導(dǎo)分化過程中的細(xì)胞分裂和凋亡現(xiàn)象，分析相關(guān)基因表達(dá)的變化，初步探討神經(jīng)分化的機(jī)制：運(yùn)用膜片鉗技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)元樣細(xì)胞的動(dòng)作電位檢查；建立腦梗塞模型鼠，進(jìn)行成人MSC的局部

3、腦內(nèi)移植治療；在移植后的不同階段檢測(cè)成人MSC在大鼠腦內(nèi)的遷移和分布；運(yùn)用間接免疫熒光法檢測(cè)神經(jīng)元的特異性標(biāo)志物，并對(duì)大鼠的運(yùn)動(dòng)功能和行為學(xué)進(jìn)行觀察比較，以評(píng)價(jià)細(xì)胞移植后對(duì)受損腦組織的修復(fù)作用，探討異基因移植治療途徑，為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。一、材料與方法(一)實(shí)驗(yàn)材料1、骨髓闖質(zhì)干細(xì)胞成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(hMSC)取白骨髓(非腫瘤或血液系統(tǒng)疾病)。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SD大鼠，移植hMSC實(shí)驗(yàn)組18只，移植基礎(chǔ)培養(yǎng)液對(duì)照組18只