刪除E1B的靶向溶瘤腺病毒攜帶IL-24基因治療肝癌的研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康,其中肝癌是全球最常見的惡性腫瘤之一。我國乙肝患者眾多,是全球肝癌發(fā)病率最高的國家。肝癌因其高發(fā)生率、高死亡率、診斷困難、極易復(fù)發(fā)等而成為“癌中之王”。最新統(tǒng)計顯示,我國肝癌發(fā)病人數(shù)占全球的55％,死亡人數(shù)占全球的45％,因而肝癌的治療研究迫在眉睫。
　　 腫瘤包括肝癌是由于基因紊亂所引起的疾病,因此基因治療被普遍認(rèn)為是人類攻克癌癥的希望。尤其是靶向基因治療的研究更具有重要意義。在基因治療中,載

2、體的選擇是關(guān)鍵所在。目前病毒載體由于其具有轉(zhuǎn)染率高、基因持續(xù)表達(dá)時間長等優(yōu)點而成為腫瘤的基因治療的載體首選。
　　 腫瘤特異性增殖腺病毒(即溶瘤腺病毒),是目前最具前景的靶向基因治療載體之一。腺病毒復(fù)制最重要的元件是E1區(qū),我們用肝癌特異性啟動子alpha-fetoproteinpromoter(AFP)代替E1A本身的啟動子,構(gòu)成Ad-enAFP-E1A。E1B區(qū)主要由55kDa和19kDa組成。55kDa的缺失可以靶向P53

3、突變的腫瘤細(xì)胞,并能選擇性抑制病毒mRNA出核。19 kDa是Bc1-2的同系物,在最近的研究報道中E1B19 kDa的缺失能夠通過多途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,并且可能具有增強病毒傳播能力的作用,因此,同時刪除E1B區(qū)55kDa和19kDa,不僅可以增強病毒的靶向性,而且可以大大提高病毒的促凋亡能力,是一種新的改造溶瘤腺病毒的方法。上述構(gòu)建物簡寫為Ad.enAFP-E1A-△E1B,即為具有肝癌特異性的三靶向溶瘤腺病毒載體,此腺病毒只能靶向

4、肝癌細(xì)胞并具高的安全性和殺傷性。
　　 劉新垣院士于2001年提出了癌癥的靶向基因一病毒治療(TargetingGene-Virotherapy)的概念,之后又提出了雙靶向基因一病毒治療(Dual TargetingGene-Virotherapy)等策略。該策略中,一個靶向性的病毒載體需要攜帶一個好的腫瘤治療基因,利用溶瘤病毒在腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性裂解、增殖和腫瘤治療基因?qū)Π┘?xì)胞的強烈促凋亡作用或抑制作用“協(xié)同作戰(zhàn)”,因而達(dá)到病毒

5、在腫瘤內(nèi)特異性增殖和治療基因協(xié)同殺傷腫瘤的雙重作用。
　　 在本課題研究中,選擇黑色素瘤分化相關(guān)基因-7/白介素-24(mda-7/IL-24)基因作為新構(gòu)建的病毒載體所攜帶的腫瘤治療基因。IL-24是一個具多功能調(diào)節(jié)并誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子,由于它對腫瘤殺傷效果顯著,且具有選擇性高、對正常細(xì)胞無毒害等特點,IL-24基因成為于腫瘤基因治療中的“明星”,被廣泛應(yīng)用于腫瘤的基因治療。
　　 本研究中,IL-24插入我們

6、構(gòu)建的肝癌特異性雙靶向溶瘤腺病毒載體Ad.enAFP-E1A-△E1B中,重組成基因-病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B-IL-24。體外實驗表明Ad.enAFP-E1A-△E1B-IL-24能誘導(dǎo)肝腫瘤細(xì)胞死亡,表現(xiàn)很強的腫瘤殺傷能力,而且對正常的肝細(xì)胞幾乎沒有殺傷作用,證明其有效的安全性。肝癌細(xì)胞系Huh-7荷瘤裸鼠動物實驗證明Ad.enAFP-E1A-△E1B-IL-24能完全地抑制腫瘤的進(jìn)一步惡化,并且具有潛在的傳播能力,可

7、以殺傷肝癌細(xì)胞,提高荷瘤裸鼠的生存率。同時發(fā)現(xiàn)Ad.enAFP-E1A-△E1B-IL-24誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機制主要涉及到死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑以及線粒體/細(xì)胞色素C介導(dǎo)的調(diào)亡通路。
　　 本課題初步實踐了腫瘤的多靶向基因一病毒治療策略,成功構(gòu)建了具有肝癌特異性的溶瘤腺病毒載體,為肝癌的臨床治療研究提供了更為安全有效的腫瘤靶向基因一病毒治療方案,為成功實現(xiàn)肝癌的特異性治療奠定了堅實的基礎(chǔ)。此外,在改造腺病毒的研究中,E1B區(qū)的