常用消毒劑對白斑綜合癥病毒(WSSV)的作用及病毒在宿主的感染增殖.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒（White spot syndrome virus, WSSV）是線形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒屬（Whispovirus）的唯一成員，是一種非包涵體的類桿狀病毒，具有雙鏈環(huán)狀DNA，能感染對蝦、螯蝦等各種蝦類。該病毒宿主范圍廣，傳染力強，致死率高，是養(yǎng)殖蝦類的主要病原。本文從常用消毒劑對 WSSV的殺滅作用著手，探究實驗室及養(yǎng)殖場的消毒方式。此外，我們通過口服途徑感染WSSV，研究病毒最初侵染對蝦消化

2、系統(tǒng)的哪個組織或器官，并且研究了WSSV在宿主造血組織細胞中增殖情況及感染的病毒滴度。
　　（1）消毒劑選擇目前在水產養(yǎng)殖中常用的消毒劑有氯化物，碘化物，過氧化物和強氧化物等，較少有文獻深入報道這些消毒劑是否對 WSSV有殺滅作用及其滅活機制。本文中，我們選取了具有一定代表性的二氧化氯，碘三氧，過氧化氫和高錳酸鉀處理病毒粒子，通過分析對病毒基因組 DNA，病毒蛋白和病毒粒子感染性的影響，以確定能夠殺滅 WSSV的消毒劑的有效作用濃

3、度及作用時間。我們發(fā)現病毒的基因組DNA以及病毒結構蛋白的損傷程度與病毒感染活性呈負相關，結果表明，二氧化氯的有效濃度為50ppm，作用時間為60 min，能引起病毒結構蛋白的降解，并基本上使病毒的感染活性喪失。而高錳酸鉀在25 ppm的濃度下有效作用時間為15 min，或在50 ppm的濃度下有效作用時間為5 min，幾乎能完全降解病毒的結構蛋白和基因組DNA，而且病毒粒子完全失去感染活性。此外，碘三氧和過氧化氫濃度在250 ppm以

4、內，對WSSV沒有消毒作用。根據實驗結果，我們認為二氧化氯和高錳酸鉀是適合作為滅活 WSSV的消毒劑。
　?。?）病毒在細胞內增殖時相通過熒光定量 PCR的方法分析了WSSV在紅螯螯蝦（Cherax quadricarinatus）造血組織細胞中的增殖時相，發(fā)現在感染后12~24h內，細胞中的病毒有一定量的增殖，36h反而有一定下降，一定量的病毒粒子釋放到培養(yǎng)基中。在確定合適感染復數（MOI）的實驗中，我們通過提取感染病毒24h的

5、細胞中的總RNA，進行real-time RT-PCR，通過分析不同感染復數下病毒基因轉錄的情況，發(fā)現感染復數為MOI1000，可以達到較好的感染效果。
　?。?）病毒最初入侵的器官用含WSSV的螯蝦肌肉投喂健康對蝦來模擬自然條件下WSSV經攝食而感染，在感染后24 h內取不同的對蝦組織或器官，通過熒光定量 PCR的方法測定其病毒拷貝數，結果顯示通過口服感染的病毒主要在胃部增殖。以前掃描電鏡的結果也發(fā)現胃部能粘附更多的病毒粒子。為