2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩77頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、本研究建立了WSSV的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的快速檢測(cè)方法(Loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)的檢測(cè)方法,并將該法與研制的FITC核酸檢測(cè)側(cè)向?qū)游鲈嚰?FITC nucleic acid detection lateral flow dipstick,F(xiàn)ITC-LFD)相結(jié)合建立了更為靈敏、特異、有效、更適合實(shí)地檢測(cè)的WSSV檢測(cè)方法LAMP-LFD。
   參照GenBank上發(fā)表的

2、WSSV基因組序列中的保守的囊膜蛋白基因VP28基因序列,設(shè)計(jì)兩條特異性的引物對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并將產(chǎn)物與pDM-19T連接構(gòu)建重組載體pDMT-VP28;依照LAMP技術(shù)原理,利用Primer Explorer V4設(shè)計(jì)了四條引物利用構(gòu)建的VP28重組載體為標(biāo)準(zhǔn)模板,優(yōu)化建立了WSSV的LAMP檢測(cè)方法;而后對(duì)WSSV-DNA為模板進(jìn)行十倍系列稀釋,并以其為模板對(duì)LAMP與nested-PCR進(jìn)行了檢測(cè)限的比較。結(jié)果顯示,WSSV-

3、LAMP最佳反應(yīng)溫度為65℃、反應(yīng)時(shí)間為60min;LAMP對(duì)WSSV-DNA的最低檢測(cè)限為10拷貝、μL,而nested-PCR為100拷貝/μL,敏感性顯著顯著高于nested-PCR。
   利用異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,F(xiàn)ITC)與蛋白質(zhì)親和的作用,將其與BSA、OVA偶聯(lián);以FITC-BSA免疫BALB/c小鼠,間接ELISA測(cè)定多抗血清效價(jià),并對(duì)血清敏感性和特異性進(jìn)行鑒定以

4、確定細(xì)胞融合備用鼠。結(jié)果顯示:1號(hào)小鼠pAb效價(jià)最高,對(duì)FITC的半數(shù)抑制濃度最低,選擇用1號(hào)鼠進(jìn)行融合。利用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備FITC單克隆抗體(Monoclonal antibody,mAb),經(jīng)篩選得到6株高度敏感特異的雜交瘤細(xì)胞;以1B11體內(nèi)誘生腹水制備單克隆抗體,制備腹水效價(jià)為1/640000,半數(shù)抑制濃度IC50為7.812ng/mL,獲得了效價(jià)高、特異性強(qiáng)的FITC-mAb。
   檸檬酸三鈉還原法制備膠體金并將

5、其按3μL/條的量噴至玻璃纖維塑薄膜上;以0.5mg/mL的親和素和1 mg/mL的山羊抗鼠IgG按照1.2μL/cm得量分別標(biāo)記NC膜上的檢測(cè)線(T線)和控制線(C線);組裝FITC核酸檢測(cè)側(cè)向?qū)游鲈嚰?FITC-LFD)。利用帶有生物素的引物FIP進(jìn)行LAMP擴(kuò)增,在反應(yīng)完成前加入FITC的探針進(jìn)行雜交5min,終止反應(yīng)后以試紙檢測(cè),建立WSSV-LAMP-LFD檢測(cè)方法;根據(jù)該試紙檢測(cè)不同條件下的擴(kuò)增產(chǎn)物得到的結(jié)果,優(yōu)化得到最適檢

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論