對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)進(jìn)入宿主細(xì)胞的方式及增殖情況.pdf

1、　　對蝦白斑綜合癥病毒(White spot syndrome virus, WSSV)屬線形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒屬(Whispovirus),是一種環(huán)狀雙鏈DNA 病毒,能感染對蝦、螯蝦等各種蝦類。該病毒宿主范圍廣,傳染力強(qiáng),致死率高,是養(yǎng)殖蝦類的主要病原。本文對WSSV在蝦類血細(xì)胞和造血組織細(xì)胞中增殖情況進(jìn)行了相關(guān)的研究,并且優(yōu)化了電鏡條件下病毒固定的方法,主要包括了以下幾個方面：
　　(1)首先研究了W

2、SSV在活體或離體螯蝦的血細(xì)胞和造血組織細(xì)胞中的增殖情況,主要包括病毒基因組的轉(zhuǎn)錄復(fù)制和子代病毒的生成。結(jié)果表明,病毒侵染兩種細(xì)胞后,均可以檢測到基因組的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,但在血細(xì)胞中病毒基因組復(fù)制能力明顯低于造血組織細(xì)胞,而且基因轉(zhuǎn)錄時相也晚于造血組織細(xì)胞。電鏡結(jié)果顯示,在血細(xì)胞中2h時能觀察到有多個病毒粒子在大囊泡中,但是始終沒有觀察到子代病毒在細(xì)胞核中出現(xiàn)。而在造血組織細(xì)胞中,2h時觀察到單獨或幾個病毒粒子在小的囊泡中,在12 h時的細(xì)

3、胞核中開始出現(xiàn)子代病毒,而且隨著時間的推移,看到成簇的排列整齊的病毒粒子。
　　(2)研究了病毒進(jìn)入血細(xì)胞和造血組織細(xì)胞的方式。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)血細(xì)胞伸出偽足包圍病毒,將其吞入細(xì)胞內(nèi),然后形成有膜包圍的大的吞噬泡。而病毒入侵造血組織細(xì)胞時先吸附在細(xì)胞的表面,然后細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷,包圍病毒,形成了小的膜泡,從而進(jìn)入細(xì)胞。此外比較了紫外滅活的病毒、經(jīng)固定透析滅活的病毒和核衣殼進(jìn)入兩種細(xì)胞的情況,發(fā)現(xiàn)三者均可被血細(xì)胞吞噬進(jìn)入,而僅有完整的病

4、毒和紫外滅活的病毒可以進(jìn)入造血組織細(xì)胞。結(jié)果表明病毒進(jìn)入血細(xì)胞主要借助非特異性的吞噬機(jī)制,而病毒入侵造血組織細(xì)胞則需要囊膜蛋白介導(dǎo),說明某種或某些囊膜蛋白在侵染過程中可能發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。
　　(3)純化的病毒粒子完整性好壞是決定病毒感染效率的關(guān)鍵,電鏡是最有效的評估方法,但實際上病毒粒子囊膜對制樣過程耐受性較差而常出現(xiàn)囊膜與核衣殼脫離的狀況。為了解決這一問題,本論文采用不同濃度的多聚甲醛和戊二醛對純化的WSSV粒子進(jìn)行固定