雞AvBD6抗沙門氏菌的表達篩選與抗菌特性.pdf

1、雞白痢沙門氏菌(Salmonella pullorum,S.pullorum)是危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴重的腸道病菌之一。研究β-防御素(Avianβ-defensins,AvBDs)的雞腸道表達調(diào)控并篩選抗雞白痢沙門氏菌感染的的優(yōu)勢AvBD具有重要意義。
　　本研究通過建立雞白痢沙門氏菌感染模型,篩選抗雞白痢沙門氏菌感染的優(yōu)勢β-防御素,利用生物信息學(xué)軟件對優(yōu)勢β-防御素進行抗菌特性的構(gòu)效分析,并為提高其生物選擇活性對其進行分子設(shè)計,具體

2、內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.AvBD6抗雞白痢沙門氏菌感染的表達篩選
　　建立雞白痢沙門氏菌感染羅曼雛雞動物模型,于感染24h內(nèi)(0h,3h,6h,12h和24h)采集十二指腸組織,應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測AvBDs1-14個基因在感染過程中的表達,結(jié)果顯示雞白痢沙門氏菌感染的24h內(nèi),AvBD1、3和12的表達水平?jīng)]有檢測到顯著變化;AvBD8、10、11、13和14的表達水平在不同時間段顯著(P<0.05)下降;AvBD

3、2、4、5、6、7和9的表達水平在不同時間段顯著上升(P<0.05),其中AvBD6的表達水平升高幅度最大,且在感染24h表達水平最高。
　　2.AvBD6抗菌特性的構(gòu)效分析
　　選取AvBD6為抗雞白痢沙門氏菌感染的優(yōu)勢雞β-防御素,對其進行抗菌特性分析和DNA/RNA-AvBD6凝膠阻滯實驗。物化特性和跨膜特性分析表明AvBD6具有陽離子和雙親性并且AvBD6的抑菌靶點位于細菌胞質(zhì)內(nèi);結(jié)構(gòu)分析表明AvBD6沒有α螺旋螺旋

4、和雙親結(jié)構(gòu)域,說明AvBD6的細菌細胞膜作用能力相對較差;凝膠阻滯實驗證明AvBD6可以結(jié)合雞白痢沙門氏菌的DNA和RNA。3AvBD6的分子設(shè)計
　　在AvBD6構(gòu)效分析的基礎(chǔ)上,對其進行AvBD6分子設(shè)計,以加強細菌細胞膜作用能力,降低了等電點,增強生物活性選擇性為目的,用天冬氨酸在AvBD6的PSS位點替換了AvBD6的中性氨基酸,并在C端增加了抗菌肽BF2衍生物的α-螺旋,獲得了同時擁有三個β-折疊和一個α-螺旋結(jié)構(gòu)的Av