禽腸炎沙門氏菌抗體ELISA檢測(cè)方法的研究.pdf

1、沙門氏菌是自然界中普遍存在的一大群血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性腸道無芽孢桿菌，現(xiàn)已知的沙門氏菌血清型有2500多種。除雞白痢沙門氏菌（S.pullorum，又稱雛沙門氏菌）和雞傷寒沙門氏菌（S.gallinarum，又稱雞沙門氏菌）無鞭毛不運(yùn)動(dòng)外，其余各菌均以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，其抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，一般可分為菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原、表面(Vi)抗原和菌毛(F)抗原4種。沙門氏菌危害巨大，是一種重要的人畜共患病病原，對(duì)人畜均有致病性，它不僅能導(dǎo)致

2、雞白痢、雞傷寒、禽副傷寒、仔豬副傷寒、豬水腫病等多種動(dòng)物疾病，還能使人類發(fā)生傷寒、副傷寒、敗血癥、胃腸炎、感染性腹瀉和食物中毒。本病遍發(fā)于世界各地，給人和動(dòng)物的健康以及社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展帶來嚴(yán)重威脅。作為泛嗜性沙門氏菌的腸炎沙門氏菌（S.enteritidis，簡(jiǎn)稱SE）和鼠傷寒沙門氏菌（S.typhimurium，簡(jiǎn)稱STM）其宿主范圍更廣，危害更大。因此建立一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的沙門氏菌檢測(cè)方法極具現(xiàn)實(shí)意義。本研究旨在建立一種以鞭毛為抗

3、原的腸炎沙門氏菌抗體間接ELISA檢測(cè)方法。
　　本研究以Ibrahim介紹的沙門氏菌鞭毛酸裂解提取方法為基礎(chǔ)，優(yōu)化了鞭毛蛋白的提取條件，最后確定了鞭毛裂解的最佳pH為2.0，使鞭毛蛋白沉淀的最佳丙酮用量為鞭毛溶液的2倍體積。之后，我們以提純的的腸炎沙門氏菌鞭毛蛋白為包被抗原，建立了檢測(cè)腸炎沙門氏菌抗體的間接ELISA方法。通過反應(yīng)體系的優(yōu)化，最后確立了最佳反應(yīng)條件:抗原包被濃度為0.25μg/ml，待檢血清稀釋倍數(shù)為1∶100，

4、反應(yīng)時(shí)間為1h，酶標(biāo)二抗的稀釋倍數(shù)為1∶10000，反應(yīng)時(shí)間為45min，底物反應(yīng)時(shí)間為15min。血清陰陽性判定的臨界值為0.638。該方法與大腸桿菌、以及其它臨床常見的沙門氏菌陽性血清無交叉反應(yīng)性。批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為1.27～4.89％和2.18～9.23％，均小于10％，批內(nèi)和批間變異系數(shù)都很小，可重復(fù)性強(qiáng)。本研究建立的間接ELISA和IDEXX的陽性符合率為75％(3/4)，陰性符合率為96.69％(175/181)，總符

5、合率為96.22％(178/185)。該方法特異性和重復(fù)性均較強(qiáng)，并且與國(guó)外試劑盒的符合率較高，具有良好的潛在應(yīng)用價(jià)值。
　　最后，利用建立的間接ELISA方法對(duì)浙江7個(gè)不同地區(qū)369份雞血清進(jìn)行腸炎沙門氏菌抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陽性檢出率為7.59％(28/369)。其中的185份血清同時(shí)進(jìn)行鼠傷寒沙門氏菌抗體檢測(cè)（以相同方法建立的鼠傷寒沙門氏菌抗體ELISA檢測(cè)方法），發(fā)現(xiàn)只感染SE的為2.7％(5/185)，只感染STM的為3.78