胸腺內(nèi)注射異基因抗原誘導(dǎo)鼠神經(jīng)移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的： (1)探討小鼠胸腺內(nèi)注射異基因抗原在同種異體異基因坐骨神經(jīng)移植免疫耐受中的作用； (2)比較不同直徑的新鮮自體神經(jīng)和冷凍異體神經(jīng)移植的效果，探討神經(jīng)直徑對(duì)神經(jīng)移植效果的影響。 研究技術(shù)路線： 第一部分： 小鼠胸腺內(nèi)注射異基因抗原在同種異體坐骨神經(jīng)移植免疫耐受中的作用 1、動(dòng)物分組：48只Balb/c小鼠隨機(jī)分為4組，A組(胸腺內(nèi)注射組)；B組(自體神經(jīng)移植組)；C組(冷凍異體神

2、經(jīng)移植組)；D組(異體神經(jīng)移植加用免疫抑制劑組)。 2、自供體小鼠C57BL/6的脾細(xì)胞中提取MHc抗原注入受體鼠Balb/c小鼠胸腺內(nèi)，于2周后移植供體鼠坐骨神經(jīng)。 3、各實(shí)驗(yàn)組于3周后分別進(jìn)行電生理學(xué)、電鏡、免疫學(xué)檢測(cè)。 第二部分： (一)不同直徑新鮮自體神經(jīng)移植效果的比較研究 1、將40只SD大鼠均造成右側(cè)坐骨神經(jīng)缺損模型，隨機(jī)分成A、B、C、D組。每只鼠右側(cè)用新鮮自體神經(jīng)移植。 A

3、組：坐骨神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比1：1)； B組：橈神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比0.8：1)； C組：正中神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比0.6：1)； D組：尺神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比0.5:1)； 2、各組于術(shù)后4周、6周分別進(jìn)行運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度、組織學(xué)檢查。 (二)不同直徑冷凍異體神經(jīng)移植效果的比較研究 1、將40只SD大鼠均造成右側(cè)坐骨神經(jīng)缺損模型，隨機(jī)分成E、F、G、H組，分別用不同直徑的冷

4、凍異體神經(jīng)段移植修復(fù)缺損，每只鼠右側(cè)用冷凍異體神經(jīng)移植，E組：坐骨神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比1：1)；F組：橈神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比0.8:1);G組：正中神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比0.6:1);H組：尺神經(jīng)——坐骨神經(jīng)(直徑比0.5:1)。 2、各組分別于術(shù)后4周、6周進(jìn)行運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度、組織學(xué)檢查。 研究結(jié)果： 第一部分： 小鼠胸腺內(nèi)注射異基因抗原在同種異體坐骨神經(jīng)移植免疫耐受中的作用 1、A

5、組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度為38.23m/s與D組36.39m/s相比較無(wú)顯著性差異p＞0.05。 2、組織學(xué)、電鏡、免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果均證實(shí)B組分別優(yōu)于A組、D組、C組。 第二部分： (一)不同直徑新鮮自體神經(jīng)移植效果的比較研究 1、自體神經(jīng)移植術(shù)后4周，各組間運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度均無(wú)顯著性差異p＞0.05。 2、自體神經(jīng)移植術(shù)后6周，各組間運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度均無(wú)顯著性差異p＞0.05。 3、自體神經(jīng)移植

6、4周時(shí)，近端軸突排列整齊，髓鞘完整，中段可見新生神經(jīng)纖維成簇分布，少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，遠(yuǎn)端神經(jīng)束排列整齊，再生軸突少。6周時(shí)軸突增粗，可見少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，遠(yuǎn)端再生神經(jīng)纖維較前明顯增多。 (二)不同直徑冷凍異體神經(jīng)移植效果的比較研究 1、異體神經(jīng)移植各組術(shù)后4周，各組間有顯著性差異p＜0.05，其中坐骨神經(jīng)組最好，尺神經(jīng)組最差。 2、異體神經(jīng)移植各組術(shù)后6周，各組間有顯著性差異p＜0.05，其中尺神經(jīng)組最好、坐骨神

7、經(jīng)組最差。 3、異體神經(jīng)移植4周時(shí)，神經(jīng)近端有少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，中段可見較多的空管結(jié)構(gòu)，新生神經(jīng)纖維軸突纖細(xì)，遠(yuǎn)端可見極少再生軸突。6周時(shí)軸突增粗，但較自體組明顯差，仍有較多淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。 研究結(jié)論： 第一部分： 小鼠胸腺內(nèi)注射異基因抗原在同種異體坐骨神經(jīng)移植免疫耐受中的作用 胸腺內(nèi)注射異基因MHc抗原可誘導(dǎo)異體坐骨神經(jīng)移植的特異性免疫耐受。 第二部分： 1、神經(jīng)的直徑和移植效果之

8、間存在著密切關(guān)系，新鮮自體神經(jīng)移植時(shí)，移植神經(jīng)段的直徑只要達(dá)到缺損神經(jīng)干的1/2以上，即可產(chǎn)生與等直徑神經(jīng)移植相接近的效果。 2、冷凍異體神經(jīng)移植中，術(shù)后4周直徑粗的神經(jīng)比直徑細(xì)的神經(jīng)移植效果好，術(shù)后6周直徑細(xì)的神經(jīng)比直徑粗的神經(jīng)移植效果好。 第一部分 胸腺內(nèi)注射異基因抗原誘導(dǎo)鼠神經(jīng)移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討小鼠胸腺內(nèi)注射異基因抗原在同種異體異基因坐骨神經(jīng)移植免疫耐受中的作用。方法：自供體小鼠C5

9、7BL/6(H-2b)的脾細(xì)胞中提取MHC(H-2b)抗原注入受體鼠Balb/c(H-2d)胸腺內(nèi)，于2周后移植供體鼠坐骨神經(jīng)。48只Balb/c小鼠隨機(jī)分為4組，A組(胸腺內(nèi)注射組)、B組(自體神經(jīng)移植組)、C組(冷凍異體神經(jīng)移植組)、D組(異體神經(jīng)移植加用免疫抑制劑組)。于3周后進(jìn)行電生理學(xué)、組織學(xué)、免疫學(xué)檢測(cè)。結(jié)果：運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度，A組(38.23m/s)與D組(36.39m/s)相比無(wú)顯著性差異(p＞0.05)，組織學(xué)、電鏡、