CXCR7-CXCR4-SDF-1軸和VEGF對(duì)脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用.pdf

1、脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration，AMD)、病理性近視(pathological myopia)、中心性滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎(central exudative chorioretinopathy, CEC)、眼組織胞漿菌病(ocular histoplasmosis syndrome，OHS)、眼部腫

2、瘤和外傷等眼部疾病致盲的重要原因[1]。CNV好發(fā)于黃斑區(qū)，常引起反復(fù)出血、滲出，繼而導(dǎo)致瘢痕形成，嚴(yán)重影響中心視力。目前，CNV相關(guān)的疾病的研究是眼科學(xué)領(lǐng)域的重點(diǎn)與難點(diǎn)。
　　新生血管形成的過程是多種促血管形成因子(angiogenic factors)和抑制血管形成因子(anti-angiogenic factors)共同調(diào)節(jié)的，正常情況下二者動(dòng)態(tài)平衡。在正常血管形成的過程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞在多種因子的作用下增殖、遷移到靶組織逐

3、漸形成有序成熟的血管網(wǎng)。而在病理過程中，抑制血管生成和促進(jìn)血管生成的動(dòng)態(tài)平衡被打破，血管形成失調(diào)且導(dǎo)致不成熟的血管形成。
　　本研究探討了幾種血管生成相關(guān)基因在CNV形成過程中的作用，著重研究了基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1，SDF-1）及其受體趨化因子受體CXCR4和近年來發(fā)現(xiàn)的SDF-1的新受體CXCR7對(duì)脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和管腔形成能力的影響，同時(shí)研究了

4、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)在缺氧條件下對(duì)脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和管腔形成的影響。
　　第一部分:CXCR7/CXCR4/SDF-1軸對(duì)脈絡(luò)膜新生血管作用的體外研究
　　目的及背景:趨化因子受體CXCR4一度被認(rèn)為是基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(stromalcell-derived factor-1，SDF-1)唯一的受體，二者結(jié)合后在多種病理生理過程中發(fā)揮重

5、要的作用。近年來發(fā)現(xiàn)了SDF-1的新受體——趨化因子受體CXCR7。本研究通過體外培養(yǎng)脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(RF/6A)，對(duì)CXCR7/CXCR4/SDF-1軸在脈絡(luò)膜新生血管中的作用進(jìn)行探索。
　　方法:將RF/6A細(xì)胞置于含1％O2-94％N2-5％CO2缺氧培養(yǎng)箱中孵育，建立缺氧模型。將CXCR4-siRNA或/和CXCR7-siRNA通過脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染入RF/6A細(xì)胞內(nèi)。采用Real-time PCR法和Weste

6、rn blot法分別檢測(cè)正常氧分壓組、缺氧模型組、CXCR4-siRNA轉(zhuǎn)染組、CXCR7-siRNA轉(zhuǎn)染組、CXCR4-siRNA聯(lián)合CXCR7-siRNA轉(zhuǎn)染組中CXCR4以及CXCR7在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況。分別采用CCK-8細(xì)胞增殖分析、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、AnnexinⅤ-FITC和碘化丙啶雙染法、Matrigel管腔形成實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力、遷移能力、凋亡情況和管腔形成能力。
　　結(jié)果:在缺氧

7、培養(yǎng)條件下，RF/6A細(xì)胞中CXCR4和CXCR7在mRNA和蛋白水平表達(dá)均上調(diào)，而特異性siRNA轉(zhuǎn)染可下調(diào)CXCR4和CXCR7的表達(dá)。趨化因子受體CXCR4參與了SDF-1介導(dǎo)的RF/6A細(xì)胞的增殖和遷移，趨化因子受體CXCR7參與了RF/6A細(xì)胞的凋亡。CXCR4和CXCR7共同調(diào)節(jié)了RF/6A的管腔形成過程。
　　結(jié)論:CXCR7/CXCR4/SDF-1軸參與了體外培養(yǎng)的RF/6A細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡及管腔形成過程，其

8、中CXCR4和CXCR7發(fā)揮不同的作用。
　　第二部分:血管內(nèi)皮生長因子對(duì)脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和管腔形成的作用及機(jī)制的研究
　　目的及背景:血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種促血管形成因子，可以介導(dǎo)多種病理生理學(xué)作用。本研究探討了VEGF對(duì)缺氧培養(yǎng)的脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及機(jī)制。
　　方法:脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(RF/6A)經(jīng)MEK抑制

9、劑(PD98059)和PI3K抑制劑(LY294002)預(yù)處理后，置于含1％O2-5％CO2-94％N2的缺氧培養(yǎng)箱中孵育。用Real-time PCR和Western blot法分析正常氧分壓培養(yǎng)組、缺氧培養(yǎng)組、通路抑制劑預(yù)處理組中VEGF在mRNA和蛋白質(zhì)水平表達(dá)量的變化。采用CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)、Matrigel管腔形成實(shí)驗(yàn)分析各組增殖能力和管腔形成能力。同時(shí)也檢測(cè)ERK1/2通路和PI3K/Akt通路在其中的表達(dá)情況。