miR-27a與e-cadherin在胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系GC9811-P中表達(dá)分析的研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：鄉(xiāng)甲暉簽字日期：工，l弓年6月3日學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：鄉(xiāng)孓、卑簽

2、字日期：工，l弓年6月3日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤(pán)版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位

3、論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》中全文發(fā)表，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))一學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：鯽落導(dǎo)師簽名(手寫(xiě))：聊以彳?！尽炞秩掌冢簆l弓年易月3日簽字日期：乙I弓年‘月專日摘要率；各實(shí)驗(yàn)組均采用RTPCR、WesternBlot、MSP、實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)EcadherinmRNA和蛋白、Ecadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化、miR27a的表達(dá)量，比較各組間它們的表達(dá)差異。4、利用M

4、TT法評(píng)價(jià)各處理組GC9811P細(xì)胞的增殖情況；通過(guò)流式細(xì)胞儀觀察各處理組GC9811P細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：1、在三種胃癌細(xì)胞中，實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示GC9811P細(xì)胞的miR27a表達(dá)量最高(尸O05)；RTPCR和WesternBlot結(jié)果顯示GC9811P細(xì)胞的EcadherinmRNA和蛋白表達(dá)水平最低儼005)：MSP結(jié)果顯示GC9811P細(xì)胞的Ecadherin啟動(dòng)子區(qū)域甲基化表達(dá)水平最高(尸O05)。2、antagomi

5、r瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞GC9811P的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到60％。轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，miR27a表達(dá)明顯降低儼O05)，EcadherinmRNA和蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(尸O05)，Ecadherin啟動(dòng)子區(qū)域基因高甲基化得到逆轉(zhuǎn)儼O05)。3、MTT法檢測(cè)到轉(zhuǎn)染組的GC9811P細(xì)胞增殖速度，明顯低于空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組(尸005)；轉(zhuǎn)染組的CPIR(細(xì)胞增殖抑制率)明顯大于陰性對(duì)照組儼005)，且在轉(zhuǎn)染36h后最大。

6、4、流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組的GC9811P細(xì)胞系凋亡細(xì)胞率明顯高于其它兩組(P005)。結(jié)論：1、三種胃癌細(xì)胞中胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株GC9811P的miR27a表達(dá)最高，Ecadherin表達(dá)量最低，Ecadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)最明顯；2、下調(diào)胃癌GC9811P細(xì)胞的miR27a表達(dá)，能逆轉(zhuǎn)Ecadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化，恢復(fù)Ecadherin表達(dá)；miR27a能調(diào)控Ecadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化過(guò)程