功能矯治大鼠下頜前伸后髁突軟骨iNOS表達(dá)的動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:功能矯治的最終效果一直是正畸工作者關(guān)注的重點(diǎn)之一,由于實(shí)驗(yàn)方法、設(shè)計(jì)思路以及患者的配合程度的不同,其結(jié)果也不盡相同。學(xué)術(shù)界對(duì)其存在兩種不同的觀點(diǎn),一部分學(xué)者認(rèn)為功能矯治通過(guò)前伸下頜使肌肉應(yīng)力發(fā)生改變,從而促進(jìn)髁突的改建,影響整個(gè)下頜骨的生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)而改善Ⅱ類(lèi)錯(cuò)(牙合)的面型;另有部分學(xué)者認(rèn)為功能矯治只是提前預(yù)支了下頜的最大生長(zhǎng)量,最終不會(huì)產(chǎn)生明顯的骨骼作用。正常軟骨細(xì)胞能合成少量的NO,一定的力學(xué)刺激對(duì)軟骨細(xì)胞NO的生成有影響,而i

2、NOS是合成NO的主要影響因素之一。因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究功能矯治過(guò)程中大鼠髁突軟骨iNOS的表達(dá)變化,初步了解iNOS及NO在髁突改建過(guò)程中的作用同時(shí)通過(guò)iNOS的動(dòng)態(tài)變化對(duì)功能矯治的穩(wěn)定性進(jìn)行遠(yuǎn)期的觀察,旨在為臨床工作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:選擇60只4周齡健康Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,體重90g左右,常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)7天后隨機(jī)等量分為兩組:實(shí)驗(yàn)組(S)和對(duì)照組(D),各30只。實(shí)驗(yàn)組大鼠白天配戴自制的

3、可摘式上頜斜面導(dǎo)板矯治器10-12小時(shí)引導(dǎo)下頜向前。對(duì)照組大鼠不戴矯治器,為自然生長(zhǎng)組。所有大鼠均自由飲水。實(shí)驗(yàn)組大鼠自由飲食,對(duì)照組大鼠定時(shí)喂食,以保證兩組動(dòng)物體重增加量相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)周期分別為1周(1w)、2周(2w)、3周(3w)、4周(4w)、5周(5w)、6周(6w),按實(shí)驗(yàn)周期每組隨機(jī)抽取大鼠5只斷頸處死,取右側(cè)髁突置于4％多聚甲醛中4℃固定24小時(shí),蒸餾水沖洗后室溫下用10％的EDTA脫鈣,常規(guī)處理后石蠟包埋,髁突組織塊縱向切

4、片。石蠟切片經(jīng)HE染色后觀察髁突軟骨的組織學(xué)變化并測(cè)量不同實(shí)驗(yàn)周期髁突軟骨的厚度;通過(guò)免疫組化染色應(yīng)用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0CMIAS)檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)周期髁突軟骨不同部位iNOS的表達(dá)變化。
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,從而分析不同時(shí)間周期髁突軟骨厚度的變化以及iNOS在髁突軟骨中表達(dá)強(qiáng)度的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1組織學(xué)觀察
　　

5、 肉眼觀察:大鼠髁突前后徑大于內(nèi)外徑,髁突的前斜面較長(zhǎng),后斜面偏短。
　　 1.1對(duì)照組髁突軟骨的組織學(xué)特點(diǎn)
　　 鏡下可見(jiàn)一層纖維組織即關(guān)節(jié)盤(pán)包繞在髁突軟骨表面,對(duì)應(yīng)于關(guān)節(jié)盤(pán)后帶略靠后部位的軟骨組織最厚,髁突軟骨由后向前逐漸變薄。髁突軟骨下方為骨小梁。伴隨著生長(zhǎng)發(fā)育髁突軟骨的整體厚度逐漸變薄,出現(xiàn)增齡性變化。
　　 髁突軟骨具有獨(dú)特的層域化分帶,根據(jù)細(xì)胞形態(tài)不同可分為:①纖維層為含有成纖維細(xì)胞的致密的纖維組織

6、構(gòu)成②生發(fā)層有許多致密的小細(xì)胞組成,此層細(xì)胞比較活躍,可見(jiàn)有絲分裂相③成熟層此層細(xì)胞增大,形態(tài)不規(guī)則,排列不整齊,胞核多為于細(xì)胞的一側(cè),軟骨機(jī)制增多。④移行層此層細(xì)胞腫脹,胞核不明顯,軟骨基質(zhì)明顯增多,是軟骨細(xì)胞逐漸向骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的區(qū)域。
　　 1.2實(shí)驗(yàn)組髁突軟骨的組織學(xué)特點(diǎn)
　　 功能矯治前伸大鼠下頜后髁突軟骨中后部的厚度增加,從實(shí)驗(yàn)的第2周開(kāi)始髁突軟骨的中部和后部與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,軟骨層增厚表現(xiàn)為生發(fā)層細(xì)胞數(shù)

7、增加,胞核大而明顯;成熟層較對(duì)照組也增厚,細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照組相似。髁突軟骨前部的厚度從第1周到第5周與對(duì)照組相比沒(méi)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在第6周軟骨前部厚度與對(duì)照組相比變薄有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察動(dòng)物發(fā)現(xiàn)戴用矯治器一段時(shí)間后拆除矯治器,個(gè)別大鼠下頜習(xí)慣性前伸,出現(xiàn)前牙的反(牙合)。
　　 2免疫組化結(jié)果
　　 iNOS陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色,主要定位于胞漿。陽(yáng)性細(xì)胞著色水平明顯高于背景水平,空白對(duì)照(PBS代替一抗)組未見(jiàn)陽(yáng)性著色

8、顆粒。iNOS在大鼠髁突軟骨的全層均有表達(dá),以成熟層淺層的軟骨細(xì)胞表達(dá)最強(qiáng)。iNOS的表達(dá)強(qiáng)度在髁突軟骨后部最強(qiáng),其次為前部,中部表達(dá)最弱。
　　 2.1髁突軟骨前部iNOS的表達(dá)
　　 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組前部的表達(dá)趨勢(shì)同后部相同,從第2周到第4周iNOS表達(dá)的兩兩比較有顯著性差異。前伸大鼠下頜后前部表達(dá)水平也增強(qiáng),從第1到第6周與對(duì)照組相比始終有顯著性差異。
　　 2.2髁突軟骨中部iNOS的表達(dá)
　　 對(duì)

9、照組和實(shí)驗(yàn)組中部的表達(dá)趨勢(shì)也同后部相同。對(duì)照組從第2到第4周iNOS表達(dá)的兩兩比較有顯著性差異。前伸大鼠下頜后iNOS的表達(dá)在第1周,第2周時(shí)與對(duì)照組有顯著性差異,第3周到第4周與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。
　　 2.3髁突軟骨后部iNOS的表達(dá)
　　 對(duì)照組中iNOS的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度逐漸降低,呈現(xiàn)出增齡性變化,從第2周到第5周iNOS表達(dá)的兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;實(shí)驗(yàn)組中iNOS的表達(dá)水平均高于對(duì)照組,其表達(dá)趨勢(shì)與對(duì)照組相同

10、,從第1到第5周iNOS表達(dá)與對(duì)照組相比有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)第6周iNOS的表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1生長(zhǎng)期大鼠髁突軟骨隨觀測(cè)時(shí)間的推移出現(xiàn)增齡性變化,軟骨厚度逐漸變薄;功能矯治后髁突軟骨表現(xiàn)為適應(yīng)性改建,治療初期軟骨厚度明顯增厚并隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)程逐漸變薄。
　　 2正常生理狀態(tài)下生長(zhǎng)發(fā)育期大鼠髁突軟骨中有iNOS的表達(dá),隨生長(zhǎng)發(fā)育逐漸降低,提示iNOS參與髁突正常的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。