不同時(shí)間灌服比索洛爾對大鼠腎素—血管緊張素系統(tǒng)近日節(jié)律的影響.pdf

1、目的：生物的生命活動(dòng)存在周期性的變化規(guī)律即生物節(jié)律(biorhythm)。此節(jié)律普遍存在于自然界中，是包括人類在內(nèi)所有生物的基本特征。按照周期長短，生物節(jié)律可分為三種類型：(1)超日節(jié)律(ultradian rhythm)，節(jié)律周期明顯短于24小時(shí)，一般短于20小時(shí)；(2)近日節(jié)律(circadianrhythm)，節(jié)律周期接近24小時(shí)；(3)亞日節(jié)律(infradianrhythm)，節(jié)律周期周期顯著長于24小時(shí)，一般長于28小時(shí)。近

2、日節(jié)律的發(fā)生遠(yuǎn)比其他兩種常見，人體各種生理現(xiàn)象和病理事件的發(fā)生均表現(xiàn)為典型的近日節(jié)律特征。此節(jié)律是內(nèi)源性的，同時(shí)又受到其他外界信號的導(dǎo)引。內(nèi)外兩種因素共同作用，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境與外界變化相協(xié)調(diào)。 近年來研究發(fā)現(xiàn)，生理狀態(tài)下健康人的血壓呈現(xiàn)晝高夜低的近日節(jié)律特征，此特征在維持機(jī)體正常生理功能中起到重要作用。越來越多的證據(jù)表明，高血壓患者血壓的晝夜節(jié)律特征與患者發(fā)生靶器官損害的危險(xiǎn)性密切相關(guān)。血壓晝夜節(jié)律異常時(shí)，發(fā)生心腦腎并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)

3、明顯升高。因此，充分認(rèn)識血壓的近日節(jié)律特征，深入探討生物節(jié)律調(diào)節(jié)機(jī)制，對于更好的防治高血壓及其并發(fā)癥具有重要意義。血壓調(diào)節(jié)是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，在此過程中腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin sytem，RAS)的各種活性物質(zhì)起著至關(guān)重要的作用。業(yè)已證實(shí)，RAS系統(tǒng)各組分的活性水平亦呈典型的近日節(jié)律。近年來國外一些學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，RAS的近日節(jié)律與血壓晝夜節(jié)律關(guān)系密切。時(shí)間治療學(xué)(chronotherapeutics)

4、是一門較新的學(xué)科，其主要內(nèi)容是針對人體的時(shí)間生物學(xué)特點(diǎn)，選擇合適的藥物制劑及合理的給藥時(shí)間或通過特定的給藥技術(shù)，使藥物作用與疾病發(fā)生的節(jié)律相一致，從而達(dá)到優(yōu)化治療效果、降低藥物不良反應(yīng)的目的。時(shí)間治療學(xué)在高血壓治療中占有重要地位。目前關(guān)于常用降壓藥物對血管活性物質(zhì)生物節(jié)律影響知之甚少，在此背景下我們以大鼠為模型，以不同時(shí)間灌服比索洛爾為干預(yù)因素，旨在探討RAS系統(tǒng)的近日節(jié)律特征及不同時(shí)間喂藥對其的影響。 方法：清潔級健康雄性Sp

5、rague-Dawlay(SD)大鼠128只，隨機(jī)分為四大組：早07:00對照組(MC)；晚07:00對照組(NC)；早07:00灌藥組(MT)；晚07:00灌藥組(NT)。灌藥組每日給予比索洛爾3mg/Kg，正常對照組每日給予相同體積的蒸餾水。每大組各32只，又分為4小組，每小組各8只。適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后開始按上述方案飼養(yǎng)喂藥。4周后分別于同日24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)(02:00，08:00，14:00，20:00)用鼠尾測壓儀測量各組大鼠

6、血壓并處死四大組中的各一小組大鼠并取材。在相應(yīng)的條件下留取血漿、血清及心肌組織。應(yīng)用放射免疫法檢測大鼠血漿PRA、AngII、血清ACE及心肌中的AngII的活性和濃度；通過反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)測定AT1-mRNA的表達(dá)水平。應(yīng)用余弦擬合法(cosine fitting)分析并比較4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物間PRA、AngII含量及ACE活性的時(shí)間生物學(xué)特征。采用零振幅檢驗(yàn)[2](zero amplitude test)評價(jià)各檢測指標(biāo)的近日節(jié)律是否存在。

7、應(yīng)用方差分析比較各均值之間差異的顯著性，如p＜0.05則視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果： 1.方差分析顯示，早、晚喂藥組與早、晚對照組血壓晝夜平均水平無明顯差別(p＞0.05)，早、晚喂藥組血壓平均水平亦相近。在02:00時(shí)喂藥組血壓顯著低于對照組(p＜0.05)，且晚喂組藥低于早喂藥組，其他時(shí)間點(diǎn)各組間無明顯差別(p＞0.05)。余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，早、晚喂藥組及早、晚對照組均存在典型的近日節(jié)律。早、晚喂藥組血壓的

8、峰值相位分別出現(xiàn)在21:52、21:47：早、晚對照組峰值相位分別出現(xiàn)在21:10、21:40。早、晚喂藥組較早、晚對照組振幅降低，且晚喂藥組低于早喂藥組，分別為10.7、4.4、16.3、15.8。 2.對早、晚喂藥組及早、晚對照組血液中PRA、ACE、AngII及心肌組織AngII行方差分析，結(jié)果顯示四者晝夜平均濃度或活性水平均為喂藥組低于對照組(p＜0.05)。且晚喂藥組低于早喂藥組(p＜0.05)。 3.對早、晚

9、喂藥組及早、晚對照組大鼠心肌組織AT1mRNA平均表達(dá)水平進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示，四組間無顯著差別(p＞0.05)。 4 應(yīng)用最小二乘法分別對早、晚喂藥組，早、晚對照組血液中PRA、ACE、AngII及心肌組織AngII檢測值進(jìn)行余弦擬合，得出各自擬合曲線的特征值。經(jīng)零振幅檢驗(yàn)顯示，各測量值均呈現(xiàn)近日節(jié)律特征(各組值均為p＜0.05)。早、晚對照組及早、晚喂藥組PRA峰值相位分別出現(xiàn)在13:33、13:36、16:44、17:2

10、0；血清ACE峰值相位各組分別出現(xiàn)在16:31、16:04、18:37、18:57；血漿AngII分別出現(xiàn)在17:28、17:11、19:13、20:05；心肌組織AngII分別出現(xiàn)在15:55、15:41、16:53、17:57。由此可見各指標(biāo)喂藥組較對照組峰值相位均延遲，但延遲程度有所差別，且血液中PRA、ACE、AngII峰值相位有時(shí)間順序性。血液中PRA、ACE、AngII及心肌組織AngII早、晚喂藥組較早、晚對照組余弦擬合曲

11、線振幅減小，且血清ACE變化較其他活性物質(zhì)變化較弱。 5 余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，早、晚喂藥組及早、晚對照組心肌組織AT1mRNA表達(dá)水平均呈現(xiàn)近日節(jié)律特征(各組均為p＜0.05)。各組峰值相位分別出現(xiàn)在16:08、16:35、00:32、02:42。各組節(jié)律的振幅數(shù)值接近，無顯著差異。 結(jié)論： 1.SD大鼠比索洛爾喂藥組與對照組的24小時(shí)血壓均值之間沒有差異，但喂藥組02:00血壓較對照組明顯降低。早晚不同時(shí)間喂

12、藥對血壓影響無差別。喂藥組與對照組血壓均存在近日節(jié)律，但喂藥組較對照組血壓峰值相位延遲，且晚喂藥組更明顯。 2.比索洛爾喂藥組血液中PRA、ACE、AngII晝夜平均濃度或活性水平顯著低于對照組；心肌組織AngII濃度亦呈現(xiàn)此種趨勢；不同時(shí)間喂藥對PRA、ACE、AngII的濃度影響相似，即早喂藥組與晚喂藥組無明顯差異。 3.血清PRA、ACE、AngII水平及活性均具有近日節(jié)律性，三者節(jié)律的基本特征相似。比索洛爾不同時(shí)

13、間喂藥PRA、ACE、AngII近日節(jié)律(主要表現(xiàn)在相位移位、振幅波動(dòng))改變程度不同，ACE晝夜波動(dòng)幅度相對較弱。喂藥組較對照組峰值相位后移，振幅降低；晚喂藥較早喂藥上述特征更突出。 4.比索洛爾不同時(shí)間喂藥對大鼠心肌組織內(nèi)AT1mRNA表達(dá)水平無影響。喂藥組與對照組均存在典型的晝夜節(jié)律，前者峰值相位出現(xiàn)較晚，且振幅降低。早喂藥組與晚喂藥組亦存在差異，即晚喂藥組峰值相位出現(xiàn)更遲，但振幅相同。此結(jié)果提示RAS各組分濃度或活性的晝夜