不同時(shí)間灌服氫氯噻嗪對(duì)大鼠血壓與腎素-血管緊張素系統(tǒng)近日節(jié)律的影響.pdf

1、目的：生物節(jié)律是自然界最普遍的一種現(xiàn)象。無(wú)論是低等的單細(xì)胞藻類還是包括人類在內(nèi)的高等的動(dòng)植物，生物的周期現(xiàn)象普遍存在于生命系統(tǒng)的各個(gè)層次中，這種節(jié)律現(xiàn)象有助于生命體更好的適應(yīng)周圍環(huán)境的變化。依照節(jié)律的周期長(zhǎng)短可將之分為三種類型：1.近日節(jié)律(circadian rhythm，或晝夜節(jié)律，diurnal rhythm)，節(jié)律周期接近24小時(shí)；2.超日節(jié)律(ultradian rhythm)，節(jié)律周期明顯短于24小時(shí)；3.亞日節(jié)律(infr

2、adian rhythm)，節(jié)律周期顯著長(zhǎng)于24小時(shí)。在人類和動(dòng)物界中最為常見(jiàn)且研究最多的是晝夜節(jié)律，它是由生命體內(nèi)在的生物鐘(biological clocks)周期振蕩所產(chǎn)生。心血管系統(tǒng)的多數(shù)生理與病理現(xiàn)象均屬此類。近年研究發(fā)現(xiàn)，人體血壓呈現(xiàn)典型的晝夜節(jié)律特征，即晝高夜低型。血壓晝夜節(jié)律的維持有賴于多種因素，其中腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)發(fā)揮了重要作用。該系統(tǒng)是調(diào)節(jié)人體血壓、水、電解質(zhì)和保持人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要系統(tǒng)。血壓晝夜節(jié)律

3、異常不僅增加心、腦、腎等靶器官損害，而且心腦血管事件如卒中、心肌梗死的發(fā)生率和死亡率均增加。因此，維持血壓的正常節(jié)律模式具有重要的臨床意義。噻嗪類利尿劑應(yīng)用于降壓領(lǐng)域已有半個(gè)多世紀(jì)了，其降壓效果好，價(jià)格低廉，且降低心、腦血管事件的發(fā)生率和總死亡率，在高血壓治療中具有重要地位。目前，已證實(shí)人體血壓和RAS系統(tǒng)活性成分存在典型的晝夜節(jié)律現(xiàn)象，但關(guān)于常見(jiàn)降壓藥對(duì)RAS系統(tǒng)活性成分晝夜節(jié)律的影響研究甚少。在此背景下，以氫氯噻嗪不同時(shí)間灌服方案為

4、干預(yù)因素，探討實(shí)驗(yàn)鼠血壓的晝夜節(jié)律特征及。腎素(renin)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的時(shí)間生物學(xué)特征，以及心肌組織AngⅡ 1 型受體(AT-1)mRNA表達(dá)水平的周期性變化，進(jìn)一步從分子水平探討RAS系統(tǒng)的晝夜節(jié)律特征。 方法：清潔級(jí)健康雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠128只。隨機(jī)分為四大組：早07:00對(duì)照組(MC)；晚19:00對(duì)照組(NC)；早07:00灌藥組(MT)；晚19:

5、00灌藥組(NT)。灌藥組每日給予氫氯噻嗪10mg/Kg，對(duì)照組每日給予相同容積的蒸餾水。每大組各32只。每大組又分為4小組，每小組各8只。適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后開始按上述方案飼養(yǎng)喂藥。4周后分別于同日24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)(02:00，08:00，14:00，20:00)用鼠尾測(cè)壓儀測(cè)量各組大鼠血壓并處死四大組中的各一小組大鼠并取材。分別檢測(cè)大鼠血漿腎素活性(PRA)、血漿.AngⅡ的濃度、血清ACE活性、心肌組織AngⅡ的濃度和AT-1mR

6、NA的表達(dá)水平。應(yīng)用余弦擬合法分析四組實(shí)驗(yàn)鼠血中及心肌組織中各指標(biāo)含量或活性的時(shí)間生物學(xué)特征，采用零振幅檢驗(yàn)(zero amplitude test)評(píng)價(jià)各檢測(cè)指標(biāo)的近日節(jié)律是否存在，應(yīng)用方差分析法比較各均值之間差異的顯著性，p<0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。 結(jié)果： 1.方差分析顯示，血漿PRA、AngⅡ的晝夜平均水平在早晚灌藥組(MT組與NT組)顯著高于對(duì)照組(MC組與NC組)，而MT組和NT組之間無(wú)差別。血清AC

7、E活性和心肌組織AngⅡ晝夜平均水平四組間無(wú)明顯差異。 2.方差分析顯示，早晚灌藥組能明顯降低心肌組織AT-1mRNA表達(dá)的晝夜平均水平，而MT組和NT組之間無(wú)差別。 3.余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，四組大鼠血漿PRA、AngⅡ、血清ACE、心肌組織AngⅡ濃度或活性均呈現(xiàn)出典型的晝夜節(jié)律性。MC組PRA、AngⅡ和ACE的峰值分別出現(xiàn)在13:33、17:28、16:31；NC組三者的峰值分別出現(xiàn)在13:36、17:2

8、7、16:05，與MC組無(wú)明顯差別；MT組三者的峰值分別出現(xiàn)在00:30、10:18、08:30，較對(duì)照組相應(yīng)的峰值時(shí)間提前；NT組三者的峰值分別出現(xiàn)04:06、13:45、09:52，較對(duì)照組相應(yīng)的峰值時(shí)間也提前，但落后于MT組相應(yīng)的峰值時(shí)間。此外，MT組和NT組血漿PRA、AngⅡ的余弦擬合曲線振幅均高于對(duì)照組。心肌組織AngⅡ也呈現(xiàn)出典型的晝夜節(jié)律性，MC組、NC組、MT組、NT組的峰值時(shí)間分別出現(xiàn)在15:55、15:41、05:

9、16、05:53，曲線的振幅無(wú)明顯變化。 4.余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，四組大鼠心肌組織AT-1mRNA的表達(dá)也呈現(xiàn)出典型的晝夜節(jié)律性。MC組、NC組、MT組、NT組大鼠心肌組織中AT-1mRNA峰值的出現(xiàn)時(shí)間分別位于12:18、12:15、00:44、05:36，灌藥組的曲線振幅低于對(duì)照組。 5.方差分析顯示，灌藥組的血壓平均水平顯著低于對(duì)照組，而早晚灌藥組之間無(wú)差別。在02:00和20:00時(shí)MT組和NT組的血壓

10、明顯低于MC組和NC組，在08:00和14:00時(shí)各組間無(wú)差別。余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，MC組、NC組、MT組、NT組大鼠血壓均呈現(xiàn)出典型的晝夜節(jié)律性，峰值分別出現(xiàn)在20:40、21:10、19:28、20:05，且MT組和NT組的振幅均低于MC組和NC組。 結(jié)論： 1.氫氯噻嗪早晚不同時(shí)間喂藥大鼠血漿PRA和AngⅡ平均濃度顯著高于對(duì)照組，不同時(shí)間喂藥對(duì)血清ACE和心肌組織AngⅡ無(wú)顯著影響。提示，氫氯噻嗪能夠在

11、一定程度上激活RAS系統(tǒng)的部分成分。 2.四組大鼠血漿PRA、AngⅡ濃度，血清ACE活性及心肌組織AngⅡ濃度均具有明顯的晝夜節(jié)律性。不同時(shí)間灌服氫氯噻嗪能夠在一定程度上影響上述指標(biāo)的晝夜節(jié)律(主要表現(xiàn)為峰值相位的移動(dòng)和振幅的改變)。早灌藥組較晚灌藥組對(duì)RAS系統(tǒng)各活性成分節(jié)律的提前作用明顯。 3.不同時(shí)間灌服氫氯噻嗪能下調(diào)心肌AT-1mRNA表達(dá)的平均水平。提示氫氯噻嗪在降壓的同時(shí)可能還有一定程度的心肌保護(hù)作用。四組

12、大鼠心肌AT-1mRNA表達(dá)存在晝夜節(jié)律性，不同時(shí)間灌服氫氯噻嗪可影響其心肌AT-1mRNA的晝夜節(jié)律表達(dá)，使其峰值提前，曲線振幅減低。 4.大鼠血壓具有明顯的晝夜節(jié)律性，呈晝低夜高型。早晚不同時(shí)間灌服氫氯噻嗪均能有效降低大鼠的平均血壓，尤其能明顯降低夜間血壓，而且還在一定程度上影響其血壓節(jié)律，使其峰值提前，振幅減低。 上述結(jié)果表明，大鼠血漿PRA、AngⅡ、ACE，心肌組織AngⅡ、AT-1mRNA以及血壓均具有明顯的