地塞米松對紅色毛癬菌生物學(xué)性狀的影響.pdf

1、目的：1.觀察地塞米松對紅色毛癬菌生長、菌落產(chǎn)色及抗真菌藥物敏感性的影響，為臨床及時(shí)準(zhǔn)確的診斷和合理的用藥提供理論依據(jù)。2.探討紅色毛癬菌在地塞米松干預(yù)前后基因型的差異，從基因水平探討地塞米松影響下紅色毛癬菌表型特征發(fā)生變化的可能分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：1.對臨床上經(jīng)分離鑒定的紅色毛癬菌首先采用大培養(yǎng)測定含不同濃度地塞米松沙氏培養(yǎng)基上菌落生長直徑，并繪制生長曲線，然后采用分光光度計(jì)測定含不同濃度地塞米松沙氏液體培養(yǎng)基的吸光度，最

2、后參照美國國家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLSM-38A)方案，采用微量液基法檢測不同濃度地塞米松干預(yù)下特比萘芬對紅色毛癬菌的MIC變化。2.取在含不同濃度地塞米松培養(yǎng)基上生長的紅色毛癬菌，采用真菌通用引物ITS1、ITS4對其ITS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從分子水平對其進(jìn)行鑒定，經(jīng)鑒定的紅色毛癬菌進(jìn)一步對其NTS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，觀察不同濃度地塞米松干預(yù)前后基因條帶的變化。 結(jié)果：1.從繪制的生長曲線看，當(dāng)?shù)厝姿傻臐舛葹?.05％、0

3、.1％和0.2％時(shí)，與對照組比較無明顯的變化，當(dāng)?shù)厝姿傻臐舛葹?.4％、0.8％時(shí)前五天對紅色毛癬菌生長有明顯的抑制作用，其后促進(jìn)紅色毛癬菌的生長，當(dāng)?shù)厝姿傻臐舛葹?.0％時(shí)對紅色毛癬菌生長有明顯的抑制作用。2.不含地塞米松組紅色毛癬菌的吸光度值(OD)幾何均數(shù)為0.117±0.032，特比萘芬MIC為0.063μg/ml，當(dāng)?shù)厝姿傻臐舛葹?.05％、0.1％和0.2％時(shí)，紅色毛癬菌的OD幾何均數(shù)分別為0.118±0.032、0.

4、118±0.032和0.132±0.030，MIC分另為0.081μg/ml、0.092μg/ml和0.109μg/ml與空白組比較無明顯差異(P＞0.05)；當(dāng)其濃度為0.4％、0.8％時(shí)，紅色毛癬菌的0D幾何均數(shù)分別為0.165±0.081、0.175±0.085，特比萘芬MIC分別為0.196μg/ml、0.319μg/ml與空白組比較有明顯的差異(P＜0.05)。3.引物ITSl、ITS4在不同濃度地塞米松沙氏培養(yǎng)基上生長的紅色

5、毛癬菌均擴(kuò)增出一約690bp特異條帶，5株紅色毛癬菌用引物TrNTSF-2和TrNTSR-4擴(kuò)增TRS-1區(qū)，分為Ⅱ型，用TrNTSR-1和TrNTSC-1擴(kuò)增TRS-2區(qū)，可分為Ⅰ型，帶型均比較簡單，但地塞米松干預(yù)前后帶型一致。 結(jié)論：1.低濃度的地塞米松(0.05％、0.1％和0.2％)對紅色毛癬菌的生長、產(chǎn)色和抗真菌藥物的敏感性無明顯的影響，中等濃度時(shí)(0.4％、0.8％)促進(jìn)紅色毛癬菌的生長和產(chǎn)色，且降低紅色毛癬菌對特比