耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體的生物學(xué)特性及基因組學(xué)研究.pdf

1、目的：肺炎克雷伯菌的耐藥問(wèn)題已對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成重大威脅。尋找新的可能對(duì)付耐藥菌感染的方法已迫在眉睫。本課題通過(guò)對(duì)兩株耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體的生物學(xué)特性和基因組學(xué)進(jìn)行研究，為噬菌體用于耐藥肺炎克雷伯菌感染治療提供新的思路。
　　方法：以上海多家醫(yī)院臨床分離到的多耐藥肺炎克雷伯菌為宿主菌，從環(huán)境中分離肺炎克雷伯菌噬菌體，負(fù)染法電鏡觀察其形態(tài)及大小，并分析其對(duì)pH和溫度的穩(wěn)定性，測(cè)定最佳感染復(fù)數(shù)，繪制一步生長(zhǎng)曲線(xiàn)、吸附曲線(xiàn)和感染曲線(xiàn)，并抽

2、提噬菌體核酸進(jìn)行測(cè)序及分析。
　　結(jié)果：分離得到了兩株耐藥性肺炎克雷伯菌的噬菌體KP002和KP004，電鏡確定均為有尾噬菌體。噬菌體 KP002為肌尾科噬菌體，頭部直徑約70nm，尾長(zhǎng)約80nm，尾寬約20nm。此株噬菌體在pH3～9及4～50℃的環(huán)境下具有較高活性，6分鐘吸附率達(dá)90％以上，潛伏期為10分鐘，爆發(fā)期90分鐘，裂解量為172 pfu/cell。噬菌體KP002基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，全長(zhǎng)47,173bp，GC含量

3、為48%。噬菌體KP004為短尾科噬菌體，頭部直徑約55nm，尾寬約20nm。此株噬菌體在pH3～9及4～50℃的環(huán)境下具有較高活性，6分鐘吸附率達(dá)95%以上，潛伏期為20分鐘，裂解期為100min，裂解量為147 pfu/cell。噬菌體KP004基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，全長(zhǎng)44，686bp，GC含量為53%。
　　結(jié)論：本研究分離得到兩株針對(duì)耐藥肺炎克雷伯菌的烈性噬菌體 KP002和KP004，兩株噬菌體對(duì)溫度及酸堿均具有較好

4、的穩(wěn)定性。KP002基因組與已報(bào)道的噬菌體KP15，KP32，KP34和phiKO2的基因組基本不具有相似性，與JD001的相似性為67%，且編碼相同的2個(gè)噬菌體裂解酶（溶菌酶），同時(shí)，KP002也編碼一些特異的噬菌體相關(guān)的核酸內(nèi)切酶、DNA結(jié)合蛋白、DNA聚合酶及DNA解螺旋酶。KP004基因組預(yù)測(cè)編碼54個(gè)ORFs，與已報(bào)導(dǎo)的KP34和F19等基因組具有不同程度的序列相似。KP004基因組編碼1個(gè)溶菌酶基因，4個(gè)已知功能的特異編碼基