耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體的生物學特性及基因組學研究.pdf

1、目的：肺炎克雷伯菌的耐藥問題已對公共衛(wèi)生構(gòu)成重大威脅。尋找新的可能對付耐藥菌感染的方法已迫在眉睫。本課題通過對兩株耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體的生物學特性和基因組學進行研究，為噬菌體用于耐藥肺炎克雷伯菌感染治療提供新的思路。
　　方法：以上海多家醫(yī)院臨床分離到的多耐藥肺炎克雷伯菌為宿主菌，從環(huán)境中分離肺炎克雷伯菌噬菌體，負染法電鏡觀察其形態(tài)及大小，并分析其對pH和溫度的穩(wěn)定性，測定最佳感染復數(shù)，繪制一步生長曲線、吸附曲線和感染曲線，并抽

2、提噬菌體核酸進行測序及分析。
　　結(jié)果：分離得到了兩株耐藥性肺炎克雷伯菌的噬菌體KP002和KP004，電鏡確定均為有尾噬菌體。噬菌體 KP002為肌尾科噬菌體，頭部直徑約70nm，尾長約80nm，尾寬約20nm。此株噬菌體在pH3～9及4～50℃的環(huán)境下具有較高活性，6分鐘吸附率達90％以上，潛伏期為10分鐘，爆發(fā)期90分鐘，裂解量為172 pfu/cell。噬菌體KP002基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，全長47,173bp，GC含量

3、為48%。噬菌體KP004為短尾科噬菌體，頭部直徑約55nm，尾寬約20nm。此株噬菌體在pH3～9及4～50℃的環(huán)境下具有較高活性，6分鐘吸附率達95%以上，潛伏期為20分鐘，裂解期為100min，裂解量為147 pfu/cell。噬菌體KP004基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，全長44，686bp，GC含量為53%。
　　結(jié)論：本研究分離得到兩株針對耐藥肺炎克雷伯菌的烈性噬菌體 KP002和KP004，兩株噬菌體對溫度及酸堿均具有較好

4、的穩(wěn)定性。KP002基因組與已報道的噬菌體KP15，KP32，KP34和phiKO2的基因組基本不具有相似性，與JD001的相似性為67%，且編碼相同的2個噬菌體裂解酶（溶菌酶），同時，KP002也編碼一些特異的噬菌體相關(guān)的核酸內(nèi)切酶、DNA結(jié)合蛋白、DNA聚合酶及DNA解螺旋酶。KP004基因組預測編碼54個ORFs，與已報導的KP34和F19等基因組具有不同程度的序列相似。KP004基因組編碼1個溶菌酶基因，4個已知功能的特異編碼基