變形鏈球菌LuxS基因缺陷株生物學(xué)性狀的初步研究.pdf

1、[目的]LuxS基因是變形鏈球菌生物膜早期形成過程中的關(guān)鍵基因,為探討變形鏈球菌LuxS基因在生物膜形成中的調(diào)控機(jī)制,本研究擬構(gòu)建該基因的缺陷株,并對(duì)該基因缺失后變形鏈球菌相關(guān)生物學(xué)性狀的改變進(jìn)行初步探討。
　　 [材料和方法](1)采用長臂同源多聚酶鏈反應(yīng)(LFH-PCR)方法構(gòu)建含紅霉素耐藥基因片段的LuxS基因上、下游同源序列的連接片段,轉(zhuǎn)化到變形鏈球菌中,在紅霉素的平板上篩選缺陷株,并進(jìn)行PCR及序列鑒定。(2)將變形鏈

2、球菌標(biāo)準(zhǔn)菌和構(gòu)建獲得的LuxS基因缺陷株分別在BHI液體培養(yǎng)基、含2％葡萄糖的BHI液體培養(yǎng)基、含2%蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基3個(gè)營養(yǎng)環(huán)境中生長,采用722S型可見光分光光度計(jì),對(duì)細(xì)菌生長曲線的變化進(jìn)行測(cè)定。(3)將變形鏈球菌LuxS基因缺陷株和標(biāo)準(zhǔn)菌在BHI液體培養(yǎng)基,含2%葡萄糖的BHI液體培養(yǎng)基,含2%蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基3個(gè)營養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)24小時(shí),通過掃描電鏡對(duì)不同營養(yǎng)環(huán)境中標(biāo)準(zhǔn)菌及LuxS基因缺陷株早期生物膜的形成差異進(jìn)行比較

3、。(4)將處于對(duì)數(shù)生長期的標(biāo)準(zhǔn)菌及缺陷株分別接種于含2%蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基中形成細(xì)菌生物膜,通過十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)技術(shù),初步分析生物膜形成初期不同時(shí)間點(diǎn)的可溶性蛋白表達(dá)情況。
　　 [結(jié)果](1)經(jīng)PCR和DNA序列測(cè)定分析證實(shí)變形鏈球菌LuxS基因缺陷菌株構(gòu)建成功。(2)在3種不同的營養(yǎng)環(huán)境中,變形鏈球菌UA159LuxS基因缺陷株的生長速度較變形鏈球菌UA159標(biāo)準(zhǔn)菌株相對(duì)略快。(3)

4、變形鏈球菌LuxS基因缺陷株在富含蔗糖的環(huán)境中,生物膜形成能力減弱,且形成的生物膜相對(duì)疏松;而在富含葡萄糖以及不含糖的環(huán)境中,缺陷株與標(biāo)準(zhǔn)菌形成生物膜的能力差異不大。(4)對(duì)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)上變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)菌和LuxS缺陷株生物膜中菌體可溶性蛋白未見特異表達(dá)的蛋白條帶。
　　 [結(jié)論](1)本研究成功構(gòu)建出變形鏈球菌LuxS基因缺陷株,為后期針對(duì)變形鏈球菌LuxS基因的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。(2)LuxS基因缺陷后會(huì)對(duì)變形鏈球菌的生長能力