鼠抗人PD-1單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能研究.pdf

1、博士學(xué)位論文(2006屆)鼠抗人PD一1單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能研究PreparationofmouseantihumanPD1monoclonalantibodiesandstudiesontheirbiologicalactivities研究生姓名指導(dǎo)教師姓名申請學(xué)位級別專業(yè)名稱研究方向論文提交日期明志君張學(xué)光醫(yī)學(xué)博士免疫學(xué)腫瘤免疫2006年5月鼠抗入PDI單克隆抗體的研餅及其生物學(xué)功能研究中文摘要續(xù)分泌特異抗體的雜交瘤細胞株

2、(IF2及5F10)，抗體亞型均為IgGl，lc。腹水型單抗的效價均為1：2000。經(jīng)純化后抗體的蛋白含量平均為1F2：1899mg／ml和5F10：1407mg／m1Westernblotting分析顯示，兩株抗體均特異性識別PD1／L929細胞上的大約50～55kD大小的蛋白質(zhì)?？乖稽c競爭抑制實驗提示，IF2單抗可有效抑制商品化PD1PEmAb(cloneJ116)與PD1／I929細胞上抗原位點的結(jié)合，而5F10則不能抑制。生物

3、素標記的競爭抑制實驗顯示，1F2與5F10可識別不同的結(jié)合位點。3、兩株單抗1F2和5F10對T細胞的生物學(xué)效應(yīng)、對腫瘤細胞、移植等病人血細胞上PD1的識別以及免疫組化的研究用3HTdR及MTT兩種檢測方法，對兩株單抗11：2和5F10在抗CD3單抗以及PHA激發(fā)下T細胞增殖的影響進行了探討，觀察單抗對細胞因子IL2和IFN1分泌的影響，同時對各組T細胞的表型進行了檢測。結(jié)果表明，兩株單抗具有促進抗CD3單抗和PHA激發(fā)的T細胞增殖的作

4、用。1F2mAb對CD4T細胞CD25的表達作用較CD8CD25T細胞明顯ELISA法檢測結(jié)果顯示，1F2可促進活化T細胞對IL2的分泌兩株單抗對IFNy的分泌無明顯促進作用采用兩株單抗對部分肝腎等移植病人以及白血病和貧血病人外周血PBMC和T細胞上PD1的表達進行了檢測，結(jié)果表明，采用1F2單抗能較好的識別移植病人、白血病以及貧血病人PBMC和T細胞上的PD1分子。PD1在移植病人血PBMC和T細胞上呈現(xiàn)高水平的表達，并與免疫抑制劑環(huán)

5、飽素A的應(yīng)用有關(guān)。因此，PD1分子的檢測可能對臨床移植免疫排斥監(jiān)測具有潛在的價值，以及PD1分子是否參與免疫排斥的調(diào)節(jié)作用，均有待作進一步的研究。采用流式細胞技術(shù)測定單抗1F2和5F10與不同細胞株P(guān)D1分子的表達譜，結(jié)果表明，兩株單抗均可以進行細胞表面分子的檢測和用于流式細胞術(shù)的分析PD1分子在多種類型細胞表面表達呈不均質(zhì)性，1F2mAb對腫瘤細胞株SKHep1及7721表達的PD。1有較好的識別，而5F10mAb不能識別：而在腫瘤細