人骨肉瘤原發(fā)耐藥伴高轉移原代細胞系的初步建立.pdf

1、目的：建立人骨肉瘤原代耐藥細胞系及移植性人骨肉瘤裸鼠轉移模型，為進一步闡明原發(fā)耐藥骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的分子生物學機制提供理想平臺。 方法：采用原代組織塊培養(yǎng)法對術中取得的骨肉瘤手術標本進行培養(yǎng)，在體外傳代至鏡下細胞形態(tài)均一、性狀穩(wěn)定后初步完成建系。測定原代細胞系的細胞周期、生長曲線、分裂指數(shù)、貼壁率、倍增時間，并行異種移植；測定該原代細胞株對常用化療藥物的半數(shù)抑制濃度并與MG-63、Saos-2及本科實驗室培養(yǎng)的人成骨肉瘤耐氨甲喋呤

2、細胞系Saos-2/MTX 4.4對比以判斷其耐藥程度；觀察裸鼠移植瘤模型發(fā)生遠處轉移的機率以判斷該細胞系的轉移能力，對采用異種移植法所產(chǎn)生的移植瘤進行免疫組化測定。 結果：經(jīng)過8個月的體外培養(yǎng)，建立人成骨肉瘤原代細胞系GSF-0806，至09年4月，共在體外培養(yǎng)90代，期間鏡下細胞性狀保持穩(wěn)定，無支原體、原蟲、細菌、真菌及其他細胞系污染，生物學表現(xiàn)符合骨肉瘤細胞的特征；倍增時間36.7h；細胞周期測定G1期為61.3％、G2期

3、為22.0％、S期為16.7％；該細胞株分裂指數(shù)為20.36％；4小時后貼壁率為35％，8小時后貼壁率為58％；以MTT法測定IC50顯示與Saos-2、MG-63、人成骨肉瘤耐氨甲喋呤細胞系Saos-2/MTX 4.4相比該細胞系對多種化療藥物表現(xiàn)出高度耐藥。采用細胞異種移植或瘤塊異種移植成瘤率均達100％，其異種移植所產(chǎn)生的移植瘤病理證實為骨肉瘤，相關免疫組化指標與原發(fā)腫瘤保持一致。行皮下異種移植后所種植的裸鼠中有半數(shù)以上出現(xiàn)了肺、