‘津田’蕪菁MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子BrMYB77的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子對(duì)植物自身的生長(zhǎng)發(fā)育及環(huán)境等因素的應(yīng)答反應(yīng)具有重要的調(diào)控作用。MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子是最大的植物轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一,參與了細(xì)胞分化、激素和環(huán)境因子應(yīng)答等生物過(guò)程,并對(duì)植物次生代謝、花色素形成過(guò)程以及葉片等器官形態(tài)建成具有重要的調(diào)節(jié)作用。本文以花青素合成光敏感型‘津田’蕪菁(Brassica rapa‘Tsuda’)為試驗(yàn)材料,通過(guò)同源克降的方法獲得一個(gè)MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因,序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)與擬南芥MYB77轉(zhuǎn)錄因子基因具有很高的同源

2、性,將其命名為BrMYB77基因,并對(duì)其進(jìn)行亞細(xì)胞定位等研究,以期為MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的功能研究提供基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、通過(guò)同源克隆的方法,以‘津田’蕪菁幼苗總RNA為模板,RT-PCR擴(kuò)增得到一個(gè)MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因,序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)與擬南芥MYB77轉(zhuǎn)錄因子基因具有很高的同源性,將其命名為BrMYB77基因。生物信息學(xué)分析表明 BrMYB77基因具有兩個(gè)MYB結(jié)構(gòu)域,是典型的R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子基因。

3、　　 2、將BrMYB77基因與熒光蛋白基因融合,構(gòu)建熒光表達(dá)載體GFP-BrMYB77,真空滲透法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明,BrMYB77蛋白定位于細(xì)胞核。
　　 3、將BrMYB77基因插入到pGEX-KG載體中,構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX-BrMYB77,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),通過(guò)SDS-PAGE和Western bloting驗(yàn)證GST-BrMYB77融合蛋白的表達(dá)。純化GST-BrMYB