人參皂甙Rg3對(duì)乳腺癌細(xì)胞LeY寡糖抗原及其合成關(guān)鍵酶影響的研究.pdf

1、目的： 探討人參皂甙Rg3對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7表面LeY寡糖抗原及其合成關(guān)鍵酶(FUT1/4)的作用，探討人參皂甙Rg3抑制腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移潛能的機(jī)制，為臨床腫瘤輔助治療中應(yīng)用人參皂甙Rg3提供理論依據(jù)。 方法： 體外培養(yǎng)、人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色(MTT)法檢測(cè)人參皂甙Rg3對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖活力的影響；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)人參皂甙Rg3作用后F

2、UT1 、FUT4表達(dá)情況；細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)人參皂甙Rg3作用后LeY寡糖抗原變化情況。 結(jié)果： 1．不同濃度的人參皂甙Rg3作用24h、48h后，對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用：人參皂甙Rg3在濃度為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml分別作用于人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7。24h后抑制率分別為13.36％、26.41％、35.46％、44.19％、48.

3、92％、53.65％。Rg3處理組與空白對(duì)照組比較，濃度為50μg/ml以上均明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖(p<0.05)48h后抑制率分別為25.06％、37.84％、48.40％、54.79％、70.76％、75.68％，25μg/ml以上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。作用時(shí)間上比較，24h和48h人參皂甙Rg3對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.051)。形態(tài)學(xué)分析，在倒置顯微鏡下可見，經(jīng)藥物作用后MCF-7細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞形態(tài)由

4、原來的貼壁良好、飽滿、多角形、梭形變?yōu)轭悎A形、懸浮、顏色變暗、無折光性，且隨藥物濃度的增加細(xì)胞形態(tài)變化越大。 2．RT-PCR檢測(cè)Rg3對(duì)基因FUT1、FUT4的表達(dá)水平：各實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組分別作用MCF-7細(xì)胞24h后，提取各組細(xì)胞mRNA，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)。在凝膠成像系統(tǒng)下觀察：對(duì)照組和藥物組均有FUT1 、FUT4基因、內(nèi)參基因β-action的表達(dá)，經(jīng)Lab-work軟件分析對(duì)照組FUT1 FUT4 ，表達(dá)較藥物組強(qiáng)

5、，在藥物組隨濃度增加(125μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)FUT1、FUT4表達(dá)減弱。對(duì)照組與藥物組成濃度為125μg/ml、25μg/ml、50μg/ml相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);與濃度2.100μg/ml相比有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.01)。藥物組各個(gè)濃度之間比較，濃度100μg/ml分別與濃度125μg/ml、25μg/ml、50μg/ml相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。但是125

6、μg/ml、25μg/ml、50μg/ml這三個(gè)濃度組相比無顯著差異(P>0.05)。 3.細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)LeY表示情況顯示。對(duì)照組熒光最強(qiáng)且隨藥物濃度的增加熒光強(qiáng)度逐漸減弱，藥物濃度為100μg/ml組熒炮強(qiáng)度最弱。 結(jié)論： 1.人參皂甙Rg3對(duì)MCF7腫瘤細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，并且隨藥物濃度的增加，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制能力增加。 2.合成LeY的關(guān)鍵酶基因FUT1 FUT4隨人參皂甙Rg3的作用