三氧化二砷聯(lián)合人參皂甙Rg3對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制的探討.pdf

1、研究背景與目的: 原發(fā)性肝癌為世界上最常見的惡性腫瘤之一，近年來隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展原發(fā)性肝癌的治療措施不斷改善，但肝癌的總體預(yù)后仍不能令人滿意，原因之一是原發(fā)性肝癌易于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。因此抗肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移是目前肝癌治療的一個(gè)難點(diǎn)與熱點(diǎn)。鑒于抗癌侵襲轉(zhuǎn)移需較長時(shí)間用藥，從毒副作用較小的天然植物中提取的抗癌藥物，逐漸成為一個(gè)密切關(guān)注的新領(lǐng)域。三氧化二砷(As<,2>O<,3>)具有誘導(dǎo)細(xì)胞分化、凋亡及細(xì)胞毒作用，最早運(yùn)用于急性早幼粒細(xì)胞性

2、白血病。近來許多實(shí)驗(yàn)和臨床研究也證實(shí)三氧化二砷對(duì)多種消化系腫瘤的增殖有一定的抑制作用，但對(duì)其抑制侵襲轉(zhuǎn)移方面的研究卻少有報(bào)道。但三氧化二砷潛在的毒副作用以及肝癌患者肝功能儲(chǔ)備能力相對(duì)較差使其在肝癌較長時(shí)間的運(yùn)用中受到一定程度的限制。人參皂甙Rg3是從人參中提取的單體成分，具有較低的毒副作用。多項(xiàng)研究已證實(shí)人參皂甙Rg3具有抑制腫瘤細(xì)胞粘附、侵襲轉(zhuǎn)移的作用，并對(duì)化療具有增效減毒作用。因此實(shí)驗(yàn)探討三氧化二砷和人參皂甙Rg3 (Rg3)聯(lián)合用

3、藥對(duì)人肝癌細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響以及與單獨(dú)運(yùn)用的差異，并進(jìn)一步探討其可能的影響機(jī)制，為臨床聯(lián)合抑制侵襲轉(zhuǎn)移治療、減輕藥物毒副作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)與理論基礎(chǔ)。 方法: (1) 檢測經(jīng)不同濃度的As<,2>O<,3>和Ginsenoside Rg3處理過的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株的吸光度值(OD值)，計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，并繪制隨藥物濃度變化的細(xì)胞生長抑制曲線；計(jì)算出兩藥的IC<,50>，為下一步侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)提供合適的藥物

4、濃度。 (2)不同濃度的As<,2>O<,3>(0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL)和Ginsenoside Rg3(10.0μg/mL)對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞分別單獨(dú)與聯(lián)合處理72h后，MTT法檢測人肝癌細(xì)胞對(duì)人工基底膜matrigel粘附能力的改變。 (3)As<,2>O<,3>(0.5μg/ml)和Ginsenoside Rg3(10.0μg/mL)分別與聯(lián)合作用人肝癌SMMC-7721

5、細(xì)胞72h，用無血清培養(yǎng)基配制成細(xì)胞懸液，分別轉(zhuǎn)移至transwell小室(包被/無包被matrigel)的上室繼續(xù)培養(yǎng)24h，光鏡下觀察并計(jì)算遷移至下室濾膜的細(xì)胞數(shù)。 (4)As<,2>O<,3>(0.5μg/ml)和Ginsenoside Rg3(10.0μg/mL)單獨(dú)與聯(lián)合對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞分別作用72h后，免疫組織化學(xué)方法檢測CD44v6、VEGF蛋白在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)變化，明膠酶譜分析方法檢測細(xì)胞MMP-

6、2、MMP-9的分泌情況。 結(jié)論: 1．體外的實(shí)驗(yàn)表明As<,2>O<,3>和Ginsenoside Rg3均可抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖，并具有明顯的時(shí)效一量效關(guān)系，兩種藥物聯(lián)合具有協(xié)同抑制作用。 2．不同濃度的As<,2>O<,3>和低劑量的Ginsenoside Rg3均可抑制肝癌細(xì)胞株對(duì)基底膜的粘附作用，As<,2>O<,3>對(duì)肝癌細(xì)胞粘附能力的抑制作用具有濃度依賴，聯(lián)合GinsenosideR

7、g3可增強(qiáng)As<,2>O<,3>抑制效應(yīng)。 3．As<,2>O<,3>和Ginsenoside Rg3均能抑制人肝癌細(xì)胞穿透基底膜以及運(yùn)動(dòng)的能力，兩者聯(lián)合作用可增強(qiáng)As<,2>O<,3>抑制效果。 4．As<,2>O<,3>和Ginsenoside Rg3抑制人肝癌細(xì)胞對(duì)基底膜的粘附作用可能與下調(diào)細(xì)胞粘附因子CD44v6蛋白的表達(dá)有關(guān)。其影響腫瘤細(xì)胞穿透基底膜侵襲轉(zhuǎn)移能力可能通過下調(diào)明膠酶MMP-2、MMP-9的分泌以減

8、少胞外基質(zhì)的降解，從而抑制侵襲轉(zhuǎn)移的能力，另外通過下調(diào)VEGF蛋白的表達(dá)抑制腫瘤血管的形成以達(dá)到抑制肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移作用。 5．本實(shí)驗(yàn)證明As<,2>O<,3>和Ginsenoside Rg3聯(lián)合運(yùn)用抗肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移具有協(xié)同作用，兩者聯(lián)合既體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的特色與優(yōu)勢，同時(shí)可以減輕As<,2>O<,3>的藥物毒性。因此有必要進(jìn)一步進(jìn)行臨床試驗(yàn)，從而為兩種藥物聯(lián)合推廣應(yīng)用于臨床抗肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的治療提供更加堅(jiān)實(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)