不同遺傳譜系腸外大腸埃希菌毒力因子檢測(cè).pdf

1、目的:
　　 腸外致病性大腸埃希菌(ExPEC)是引起泌尿系感染的最主要致病菌，同時(shí)也是引起新生兒腦膜炎和新生兒敗血癥的主要致病菌之一，也可以引起醫(yī)院獲得性肺炎等多種疾病。與致腹瀉性大腸埃希菌不同的是ExPEC的致病機(jī)制主要由其攜帶的毒力因子情況決定，ExPEC的致病嚴(yán)重程度也與其遺傳譜系分型情況相關(guān)。為了了解天津地區(qū)ExPEC毒力因子攜帶情況及遺傳譜系分型情況，本課題選取210株不同來(lái)源的ExPEC菌株作為研究對(duì)象，通過(guò)檢測(cè)菌

2、株30種毒力因子(VFs)，了解其基因的檢出情況，不同來(lái)源單個(gè)基因的分布情況;通過(guò)對(duì)ExPEC菌株進(jìn)行遺傳譜系分型，將菌株分為A組、B1組、B2組和D組，了解其系統(tǒng)化分組情況，不同來(lái)源菌株系統(tǒng)化分組的差異情況。初步探討ExPEC毒力因子與遺傳譜系分型之間的關(guān)系，探究ExPEC的分子流行病學(xué)特點(diǎn)，以便為更好的了解ExPEC提供臨床解讀。
　　 方法:
　　 收集2010年12月至2011年12月分離的共210株分離自痰液、

3、尿液、血液及其他部位的非重復(fù)感染大腸埃希菌作為實(shí)驗(yàn)菌株。根據(jù)來(lái)源不同將菌株分為Ⅰ組（痰液組）、Ⅱ組（尿液組）和Ⅲ組（血液、拭子及分泌物等）。將30對(duì)毒力因子基因根據(jù)擴(kuò)增片段的大小分為5組，分別采用6重3步PCR方法進(jìn)行基因片段擴(kuò)增，然后通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳的方式判斷毒力因子基因的檢出情況;并分別統(tǒng)計(jì)不同來(lái)源菌株單個(gè)毒力因子基因檢出情況及單個(gè)菌株毒力因子基因檢出數(shù)量進(jìn)行比較。采用3重2步PCR方法對(duì)遺傳譜系分型3種基因進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)比對(duì)瓊脂

4、糖凝膠電泳產(chǎn)生條帶情況對(duì)ExPEC菌株進(jìn)行分組，并根據(jù)不同來(lái)源菌株進(jìn)行分組比較。對(duì)臨床分離菌株毒力因子基因的檢出情況與遺傳譜系分型情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較菌株遺傳譜系分型各組間毒力因子基因的檢出情況有否差異。
　　 結(jié)果:
　　 ExPEC中毒力因子基因fimH、fyuA、traT、iutA、kpsMTⅡ、PAI的檢出率較高，分別為79％、75％、74％、73％、62％和46％;不同來(lái)源的ExPEC菌株分組比較顯示有5種

5、毒力因子在非尿液來(lái)源中檢出率更高，分別是papGalleleⅡ(Internal)、papC、papA、papEF和rfc。
　　 ExPEC菌株遺傳譜系分型4個(gè)系統(tǒng)進(jìn)化組A組、B1組、B2組和D組分別以3個(gè)基因的檢出情況判斷:chuA（-）、YjaA（+/-）和TSPE4.C2（-）;chuA（-），YjaA（+/-）和TSPE4.C2(+);chuA(+)，YjaA(+)，TSPE4.C2（+/-）和chuA(+)，YjaA

6、（-）和TSPE4.C2（+/-）。4個(gè)系統(tǒng)進(jìn)化組所占比例分別為24％、11％、29％和36％;不同來(lái)源的ExPEC遺傳譜系分型情況也略有不同，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示痰標(biāo)本來(lái)源的菌株比尿液標(biāo)本來(lái)源的菌株中分型為B2組的更多，而其他各組之間的比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 在進(jìn)行ExPEC菌株遺傳譜系分型各組之間毒力因子基因檢出情況的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較顯示，6種毒力因子基因的檢出情況與細(xì)菌遺傳譜系分型之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，它們分別是traT、iutA、pag

7、G alleⅢ、ibeA、papG flanking、sfaS;毒力因子中有8種僅與B2組聯(lián)系密切，分別是pagG alleⅡ、papA、sfa/focDE、hlyA、rfc、cnfl、cvaC和focG;有4種僅與D組聯(lián)系密切，分別是papGflankingⅡanaⅢ、afa/draBC、kpsMTⅢ和nfaE;有6種與B2組和D組均有關(guān)系，分別是fyuA、PAI、K5、papEF、K1和papC。在對(duì)菌株毒力因子基因檢出個(gè)數(shù)的統(tǒng)計(jì)發(fā)

8、現(xiàn)隨著菌株毒力因子檢出個(gè)數(shù)的增加，A組及B1組所占比例逐漸減少，而B(niǎo)2組和D組，尤其是B2組所占比例逐漸增加。
　　 結(jié)論:
　　 ExPEC存在毒力因子以及毒力因子的種類和數(shù)量影響菌株的致病性，毒力因子基因fimH、fyuA、traT、iutA、kpsMTⅡ、PAI在菌株中存在廣泛的流傳性;非尿液來(lái)源標(biāo)本引起機(jī)體致病可能需要種類更廣泛、毒力更強(qiáng)的毒力因子的存在，從痰液標(biāo)本分離出的ExPEC菌株可能比來(lái)自于尿液標(biāo)本的菌株