化濁解毒湯對(duì)酒精性肝病大鼠療效和作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：酒精性肝病（ALD）是由于長期大量飲酒（嗜酒）所致的肝臟損傷性疾病。近年來中國酒精性肝病的發(fā)生率呈明顯上升趨勢(shì)，已經(jīng)成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。目前國內(nèi)外尚無防治酒精性肝病的特效藥，而中醫(yī)中藥因副作用相對(duì)較小具有廣泛的應(yīng)用和開發(fā)前景。李佃貴教授認(rèn)為，ALD的病因病機(jī)為，醇酒濕熱有毒，酒毒傷胃，胃失和降，濁邪阻滯，酒毒與濁邪陰陽交爭(zhēng)，搏結(jié)為“濁毒”，停滯中焦，留于脅下，日久留戀不去。濁與毒反復(fù)膠結(jié)，成為酒精性肝病發(fā)生的關(guān)鍵。李

2、佃貴教授根據(jù)ALD濁毒阻滯中焦的病機(jī)擬定化濁解毒湯，由葛根、田基黃、荷葉、茵陳、丹參等組成，具有化濁解毒，清熱利濕，肝胃同治的功效。本研究擬通過實(shí)驗(yàn)研究，觀察化濁解毒湯的療效，并探討其作用機(jī)理，為中醫(yī)藥治療ALD提供療效確切可靠的藥物，為濁毒致病理論提供臨床和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究旨在通過建立慢性酒精性肝病大鼠模型，觀察以化濁解毒法立法的化濁解毒湯對(duì)酒精性肝病大鼠組織病理學(xué)、血清學(xué)、免疫組化等指標(biāo)的影響，試圖探討化濁解毒湯治療酒精性肝病作用機(jī)

3、制，驗(yàn)證化濁解毒法治療酒精性肝病的可行性和實(shí)用性。
　　 方法：將健康雄性SD大鼠60只，體重190-210g，隨機(jī)分為五組：正常組（A）、模型組（B）、甘利欣組（C）、化濁解毒湯低劑量組（D）、化濁解毒湯高劑量組（E）。除正常組外，其余四組均采用二鍋頭白酒-玉米油混懸液灌胃方法制備大鼠酒精性肝病的動(dòng)物模型。造模8周后，B、C、D、E四組分別給予生理鹽水、甘利欣、化濁解毒湯低劑量、化濁解毒湯高劑量進(jìn)行對(duì)照研究。實(shí)驗(yàn)同時(shí)觀察動(dòng)物的

4、神態(tài)、外觀、活動(dòng)情況。在實(shí)驗(yàn)第12周全部處死大鼠，取大鼠血清做肝功能、肝纖維化、CAT和IL-8指標(biāo)檢查，取大鼠肝組織做HE染色及COX-2的免疫組化。所有數(shù)據(jù)均用spss11.5軟件處理，組間顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。
　　 結(jié)果：
　　 1、一般情況
　　 正常組大鼠毛色光澤、精力充沛、行動(dòng)自如、食量及大便正常。模型組大鼠每天早晨灌酒后不久就出現(xiàn)動(dòng)作遲緩，四肢癱軟，步履蹣跚。皮毛疏松

5、欠光澤，精神萎靡，體形消瘦，易激惹。體重后期下降，有的糞便變稀松。用藥1周后，各治療組灌胃時(shí)，大鼠反抗力增強(qiáng)，大小依次為高劑量組、低劑量組、西藥組。
　　 2、肝臟組織病理學(xué)變化
　　 2.1各組大鼠肝臟大體觀察
　　 肉眼觀察正常組肝被膜光滑，表面顏色暗紅，色澤鮮亮，彈性好。模型組肝臟表面粗糙，色澤晦暗，體積增大，呈淡黃色，觸之較正常略硬，切面油膩感。西藥組和中藥組肉眼無明顯特征。
　　 2.2各組大鼠

6、肝臟切片HE染色
　　 正常組：肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝板以中央靜脈為中心向周圍呈放射狀整齊排列，核大而圓，位于細(xì)胞的中央。
　　 模型組：以肝臟脂肪變?yōu)橹?，肝?xì)胞腫大，以小葉中央?yún)^(qū)受累明顯，胞漿內(nèi)可見大小不等脂滴，匯管區(qū)可見淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤，偶見酒精透明小體（Mallory小體）。
　　 甘利欣組：脂肪變性顯著減輕，可見肝細(xì)胞輕微增大，部分細(xì)胞出現(xiàn)較小脂滴，散在于細(xì)胞核周圍，偶見匯管區(qū)少量淋巴細(xì)

7、胞和漿細(xì)胞浸潤。
　　 化濁解毒湯低劑量組：脂肪變性顯著減輕，可見肝細(xì)胞內(nèi)細(xì)小脂肪空泡和細(xì)胞嗜酸性變，且小葉間有散在的炎性灶及血管周圍炎。
　　 化濁解毒湯高劑量組：肝細(xì)胞脂肪變性已基本消失，僅在高倍鏡下見部分肝細(xì)胞漿內(nèi)小的空泡變性及炎性灶。
　　 3、酒精性肝病大鼠血清中肝臟各指標(biāo)的變化
　　 3.1肝功能的變化
　　 模型組大鼠血清中 AST、ALT含量明顯高于正常組（P<0.01）。給藥后各

8、治療組 AST、ALT含量明顯低于模型組（P<0.05），其中化濁解毒湯高劑量組大鼠血清中AST、ALT含量明顯低于西藥組、低劑量組（P<0.05）。
　　 3.2 CAT活性的變化
　　 模型組大鼠血清中CAT含量較正常組明顯降低（P<0.01）。給藥后各治療組CAT含量均高于模型組（P<0.05），其中化濁解毒湯高劑量組大鼠血清中CAT含量明顯高于西藥組、低劑量組（P<0.05）。
　　 3.3肝纖指標(biāo)的變化

9、
　　 模型組大鼠血清中HA、PⅢP含量較正常組明顯降低（P<0.01）。給藥后各治療組HA、PⅢP含量均高于模型組（P<0.05），其中化濁解毒湯高劑量組大鼠血清中HA、PⅢP含量明顯高于西藥組、低劑量組（P<0.05）。
　　 3.4 IL-8活性的變化
　　 模型組大鼠血清中IL-8含量較正常組明顯降低（P<0.01）。給藥后各治療組IL-8含量均高于模型組（P<0.05），其中化濁解毒湯高劑量組大鼠血清中

10、IL-8含量明顯高于西藥組、低劑量組（P<0.05）。
　　 4、肝臟組織經(jīng)免疫組化（SP法）染色COX-2的表達(dá)
　　 正常組大鼠肝臟無COX-2的表達(dá)。模型組大鼠肝組織內(nèi)COX-2的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01），呈棕黃色的COX-2陽性顆粒彌漫于細(xì)胞漿。給藥后各治療組COX-2的表達(dá)均高于模型組（P<0.05），其中化濁解毒湯高劑量組COX-2的表達(dá)明顯高于西藥組、低劑量組（P<0.05）
　　 結(jié)論：