Tim-1及Tim-3在ITP患者免疫失衡中的作用及相關(guān)研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　免疫性血小板減少癥(Immune thrombocytopenia，ITP)，是一種自身抗體介導(dǎo)的血小板減少綜合征，臨床表現(xiàn)為皮膚黏膜出血，內(nèi)臟出血，甚至顱內(nèi)出血，嚴(yán)重影響人類健康。ITP的發(fā)病機制錯綜復(fù)雜，目前認(rèn)為血小板破壞過多和（或）產(chǎn)生不足是ITP發(fā)病的的重要機制。盡管B細(xì)胞的過度增殖、活化和成熟產(chǎn)生的多種針對血小板的自身抗體被認(rèn)為是ITP發(fā)病的直接原因，研究表明T細(xì)胞功能異常和細(xì)胞因子比例失調(diào)導(dǎo)致B細(xì)

2、胞異常激活可能是ITP發(fā)病的重要機制，其中T輔助細(xì)胞(Th)1、Th2、Th17亞群和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例失調(diào)和功能紊亂是ITP免疫失耐受的重要原因。近年來，T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1(T cell immunoglobulin-and mucin domain-containing molecule，Tim-1)及Tim-3在自身免疫性疾病中的作用日益受到人們的重視。Tim-1，選擇性表達(dá)在Th2細(xì)胞表面

3、，為T細(xì)胞的活化提供協(xié)同信號，并促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌;而Tim-3通過與Tim-3配體結(jié)合，給T細(xì)胞提供一種負(fù)性共刺激信號，下調(diào)Th1及Th17細(xì)胞的反應(yīng)。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病的患者中已經(jīng)檢測出上述因子mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)失衡，而在ITP患者中的表達(dá)尚無報道。本研究旨在檢測Tim-1及Tim-3在ITP中是否存在異常并初步探討Tim-1和Tim-3在免疫失衡中的作用。
　　研究方法:
　　(1)收集

4、活動期ITP患者45例，緩解期ITP患者34例，正常人對照31例，采集外周血標(biāo)本。
　　(2)收集我院行外科手術(shù)治療ITP患者脾切除標(biāo)本17例，因創(chuàng)傷性脾破裂進(jìn)行手術(shù)切除的正常脾臟標(biāo)本10例。
　　(3)從外周血分離外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)，脾臟標(biāo)本提取脾單個核細(xì)胞。提取mRNA。
　　(4)通過熒光定量PCR方法檢測ITP患者外周血單個核細(xì)胞及脾臟單個核細(xì)胞中Tim-1和Tim-3的mRNA表達(dá)水平，同時檢測轉(zhuǎn)

5、錄因子T-bet及GATA3mRNA的表達(dá)水平。
　　(5)通過流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD4+T細(xì)胞Tim-3的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)ITP患者外周血單個核細(xì)胞中Tim-1、Tim-3及轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3mRNA表達(dá)水平
　　活動期ITP患者組外周血單個核細(xì)胞中Tim-1mRNA的表達(dá)是正常對照組的（2.2±1.31）倍(P＞0.05)，是ITP緩解組的（1.8±0.97）倍（P＞0.05）

6、;活動期ITP患者組Tim-3mRNA的表達(dá)是正常對照組的（0.27±0.13）倍(P＜0.05)，是ITP緩解組的（0.24±0.11）倍(P＜0.05);ITP患者組Tim-3/Tim-1的比值明顯降低?；顒悠贗TP患者組外周血單個核細(xì)胞中T-betmRNA表達(dá)為正常對照組的（2.9±1.34）倍(P＜0.05)，是ITP緩解組的（2.70±1.14）倍(P＜0.05);活動期ITP組GATA3mRNA的表達(dá)較正常對照組明顯降低，為

7、對照組的（0.5±0.22）倍(P＜0.05)，是ITP緩解組的（0.53±0.16）倍(P＜0.05);ITP患者組T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA3的比值明顯升高。
　　(2)ITP患者脾單個核細(xì)胞中Tim-1、Tim-3及轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3mRNA表達(dá)水平
　　ITP患者組脾臟單個核細(xì)胞中Tim-1mRNA的含量較正常對照組有升高趨勢，為對照組的（3.20±2.18）倍，(P＞0.05);ITP患者

8、組Tim-3mRNA的表達(dá)下降，是正常對照組的（0.29±0.16）倍（P＜0.05）。ITP患者組Tim-3/Tim-1的比值是正常對照組0.12倍，(P＜0.05)。ITP患者組脾臟中T-betmRNA表達(dá)為正常對照組的（2.82±1.57）倍(P＜0.05);ITP患者組脾臟中GATA3mRNA的表達(dá)較正常對照組明顯降低，為對照組的（0.14±0.10）倍(P＜0.05);ITP患者組T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA3的比

9、值是正常對照組25倍（P＜0.05）。
　　(3)ITP患者外周血CD4+T細(xì)胞Tim-3的表達(dá)水平及與Th1細(xì)胞相關(guān)性
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:與正常對照相比（1.34％±0.13％），活動期ITP患者組外周血CD4+T細(xì)胞Tim-3的表達(dá)水平明顯下降（0.77％±0.11％）(P＜0.05);且CD4+T細(xì)胞Tim-3陽性率與Th1細(xì)胞量呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.53(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　

10、(1)活動期ITP患者組外周血單個核細(xì)胞中Tim-3mRNA表達(dá)水平較正常對照及ITP緩解組明顯降低;Tim-1有升高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)ITP患者脾臟單個核細(xì)胞Tim-3mRNA表達(dá)水平較正常對照組亦明顯降低;Tim-1有升高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(3)ITP患者組T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA3的比值明顯升高。
　　(4)Tim-1及Tim-3表達(dá)失衡在ITP的免疫紊亂和發(fā)生發(fā)展中起著一定