慢乙肝患者外周血CD8+T細(xì)胞Tim-3表達(dá)及意義.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)慢性乙型肝炎( chronic hepatitis B， CHB)患者外周血CD8+T細(xì)胞T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白結(jié)構(gòu)域分子-3(T cell immunoglobulin-andmucin-domain-containg molecule-3, Tim-3)的表達(dá)，進(jìn)一步研究Tim-3分子對(duì)CHB患者CD8+T細(xì)胞增殖能力及HBV特異性CTL功能的影響。
　　 方法：
　　 1、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)58例CHB

2、患者和16例健康體檢者外周血單個(gè)核細(xì)胞( peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中CD8+T細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平。
　　 2、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(5,6- carboxyfluorescein diacetate,sucanimidyl ester, CFSE)標(biāo)記9例（58例檢測(cè)Tim-3表達(dá)CHB患者中9例）患者外周血PBMC,IL-2維持，培養(yǎng)7天；流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合C

3、FSE技術(shù)檢測(cè)Tim-3mAb阻斷Tim-3/Tim-3配體(Tim-3L)通路前后，CHB患者外周血PBMC中CFSElowCD8+T淋巴細(xì)胞比例的改變。
　　 3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CHB患者組織相容性白細(xì)胞抗原-A2(histocompatibilityleukocyte antigen-A2, HLA-A2)分型。
　　 4、HBcAg18-27(序列：FLPSDFFPSV)多肽刺激下采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(enzyme-

4、 linkedimmunosorbent spot, ELISPOT)技術(shù)檢測(cè)Tim-3mAb阻斷Tim-3/Tim-3L通路前后，9例(另取檢測(cè)Tim-3表達(dá)58例中9例CHB患者)HLA-A2陽(yáng)性患者外周血PBMC中產(chǎn)生干擾素γ（Interferon gamma, IFN-γ）的HBV特異性CTL數(shù)量的改變。
　　 結(jié)果：CHB患者外周血PBMC中CD8+T淋巴細(xì)胞Tim-3分子表達(dá)水平較健康對(duì)照顯著升高；Tim-3mAb阻