年輕乳腺癌發(fā)生及預(yù)后因素篩選研究.pdf

1、第一部分 目的：年輕乳腺癌與年老乳腺癌相比更具侵襲性，易發(fā)生淋巴結(jié)或血行轉(zhuǎn)移，惡性程度高，預(yù)后差。其預(yù)后受多種因素影響，目前國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)多集中在與非年輕乳腺癌生存率比較及臨床預(yù)后因素分析，主要在臨床病理方面，如臨床分期、腫瘤大小、病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，而與之相關(guān)的生物學(xué)特征研究涉及較少。本研究不但分析與乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)歸有關(guān)的臨床病理因素，亦試圖篩選出預(yù)示不良的相關(guān)生物學(xué)因素。通過(guò)本研究，力圖比較全面地研究年輕乳腺癌這一問(wèn)題，從臨

2、床、病理、生物學(xué)等各方面揭示相關(guān)危險(xiǎn)因素，以期早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，改善患者生存率。 方法：收集我院1994年1月～1998年4月共191例≤35歲女性原發(fā)性乳腺癌，其中99例為臨床資料、病理切片、隨訪工作完整及初治可手術(shù)病例，選取63例腫瘤蠟塊組織作生物學(xué)指標(biāo)的免疫組化染色。按國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年TNM分期標(biāo)準(zhǔn)重新分期。復(fù)習(xí)病理切片包括病理分類、組織學(xué)分級(jí)、淋巴管侵犯、軟組織受累、EIC、淋巴結(jié)受累等形態(tài)學(xué)指標(biāo)。病

3、理組織學(xué)分類按WHO(2003) 標(biāo)準(zhǔn)。免疫組化法檢測(cè)年輕乳腺癌的ER(雌激素受體)、PR(孕激素受體)、AR (雄激素受體)、C-erbB2、P53、Ki67、BRCA1 的蛋白表達(dá)情況。按5年生存率將病例分為預(yù)后優(yōu)差兩組，比較兩組病例的病理學(xué)及生物學(xué)方面的差異。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，5年生存率的比較采用x<'2>檢驗(yàn)，Kaplan-Meier檢驗(yàn)病理學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)亞型的生存曲線，辨認(rèn)預(yù)后因素首先采用單因素分析，再將預(yù)后不良因素引入多因素C

4、OX回歸模型進(jìn)行生存分析，篩選出預(yù)示不良預(yù)后的參數(shù)。 結(jié)果：99例≤35 歲女性乳腺癌均隨訪5年，隨訪率100％。年輕乳腺癌占同期乳腺癌的6.6％(191/2890)。乳腺癌家族史陽(yáng)性者10例，占10.1％(10/99)。組織學(xué)分類導(dǎo)管內(nèi)癌3例，導(dǎo)管癌微小浸潤(rùn)2例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌89例，其余類型5例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)11例，Ⅱ級(jí)49例，Ⅲ級(jí) 34例。淋巴管侵犯26例(26.3％)，軟組織受累34例(34.3％)，EIC 陽(yáng)性 39例

5、(39.4％)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為59.6％(59/99)。ER、PR、AR、C-erbB2、Ki67、P53、BRCA1 蛋白表達(dá)率分別為57.1％(36/63)、49.2％(31/63)、43.5％(27/62)、41.3％(26/63)、19.4％(12/62)、35.6％(21/59)、21.1％(12/57)。全組5年遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率為28.0％(26/93)，5年生存率72.7％(72/99)。BRCA1 蛋白表達(dá)與年齡、乳腺癌家族史

6、無(wú)相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。經(jīng)x<'2>檢驗(yàn)顯示，TNM分期不同的病例生存率不同，Ⅲ期死亡率最高為60.6％(P<0.05)；治療方式不同的病例生存率統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異，其中采用根治術(shù)及去勢(shì)療法者死亡率最高(P<0.05)。單因素分析顯示，淋巴管侵犯、軟組織受累、EIC、淋巴結(jié)受累、AR 和 c-erbB2表達(dá)情況對(duì)預(yù)后有影響。多因素COX 回歸分析淋巴結(jié)受累 1～3，4～6，>6的死亡風(fēng)險(xiǎn)分別是淋巴結(jié)陰性的1.49、6.70、15.36倍

7、，AR 陽(yáng)性病例的死亡風(fēng)險(xiǎn)是陰性者的0.245倍，C-erbB2(+)、(++)、(+++)死亡風(fēng)險(xiǎn)分別是 C-erbB2(—)的15.12、10.61、8.31倍，表明淋巴結(jié)受累、AR、C-erbB2是年輕乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后因素。 結(jié)論：年輕乳腺癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且日益年輕化。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及C-erbB2表達(dá)情況是影響年輕乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)后因素，AR可作為一種輔助預(yù)后因子，年齡不是本影響預(yù)后的因素，人為干預(yù)手段不能

8、從根本上影響患者轉(zhuǎn)歸。 第二部分 目的：年輕乳腺癌發(fā)病年齡早，與遺傳易感基因的突變有密切聯(lián)系。目前國(guó)內(nèi)研究遺傳易感基因突變的文章主要關(guān)注家族性乳腺癌或非年輕散發(fā)性乳腺癌(>40歲)，關(guān)于早發(fā)性乳腺癌只有為數(shù)不多的文獻(xiàn)涉及。BRCA1基因是已經(jīng)證實(shí)的乳腺癌遺傳易感基因，在年輕乳腺癌中突變率約8％～20％。BRCA1是一個(gè)很大的基因，發(fā)生突變的位點(diǎn)很多，可發(fā)生多形式多位點(diǎn)的基因突變，而且新的突變形式還在不斷地被發(fā)現(xiàn)，迄今已檢

9、測(cè)到的變異不下600種。本研究收集≤35歲散發(fā)性乳腺癌病例，從已有文獻(xiàn)的檢索中選擇相對(duì)有代表性的BRCA1基因編碼區(qū)域，尋找其致病突變位點(diǎn)，篩查中國(guó)年輕乳腺癌BRCA1基因的突變位點(diǎn)及SNP攜帶情況，探討B(tài)RCA1基因突變熱點(diǎn)及其與年輕乳腺癌的關(guān)系。希望能夠展示中國(guó)人年輕乳腺癌BRCA1基因突變的形式和位點(diǎn)，豐富目前的突變譜，并探討B(tài)RCA1突變對(duì)于乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、發(fā)病檢測(cè)、早期診斷的臨床意義。 方法：收集我院1994年1月

10、～1998年1月≤35歲乳腺癌蠟塊標(biāo)本14例；2005年10月～2006年8月≤35歲乳腺癌患者手術(shù)切除的癌組織16例，共30例，均無(wú)血緣關(guān)系，其中5例有至少一個(gè)一級(jí)親屬患乳腺癌。病理分型為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌26例，占86.7％(26/30)。腫瘤蠟塊及新鮮癌組織取約 30mg 通過(guò) TiSSIJeDNA Kit 試劑盒提取基因組DNA。對(duì)BRCA1基因第2、11C、11F、11L、11I、16、20 外顯子的編碼序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物

11、進(jìn)行DNA純化及雙向序列測(cè)定。利用 DNA Star-MagAlign 分析軟件進(jìn)行序列比較，搜尋單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)；采用美國(guó)生物技術(shù)信息中心(NCBI)網(wǎng)站的Blast2應(yīng)用程序進(jìn)行核苷酸翻譯為蛋白質(zhì)的比對(duì)，確定該突變位點(diǎn)是否引起編碼氨基酸的改變。 結(jié)果：測(cè)序長(zhǎng)度為2105 bp，占外顯子序列總長(zhǎng)的37.6％(2105/5600)。結(jié)果共發(fā)現(xiàn)14個(gè)序列變異，其中4個(gè)不改變氨基酸的編碼，10個(gè)改變氨基酸的編碼，分布在第

12、2、11C、11F、11I、11L外顯子分別為3、3、2、2、4個(gè)，第16、20號(hào)外顯子未發(fā)現(xiàn)序列變異。在BRCA1基因中共發(fā)現(xiàn)有3個(gè)致病突變位點(diǎn)，分別位于2、11L外顯子上，突變率為10％(3/30)，均為移碼突變(cDNA2639、2640delTA及3343delG、3398delT)，其中2個(gè)乳腺癌家族史陽(yáng)性；發(fā)現(xiàn)1個(gè)未分類突變(2806T>C)，為一錯(cuò)義突變，乳腺癌家族史陽(yáng)性；篩查出10個(gè)單核苷重復(fù)多態(tài)位點(diǎn) (cDNA2570

13、 C>T、cDNA2620 A>T、1473A>G、1561C>T、1594G>A、2206A>G、2227T>C、2659C>A、3307A>G、3375G>A)，分別位于2、11C、11F、11I、11L。 結(jié)論：BRCA1突變主要位于第11號(hào)外顯子上，乳腺癌家族史陽(yáng)性的年輕乳腺癌突變率高，在BRCA1基因中發(fā)現(xiàn)的3個(gè)致病突變位點(diǎn)可能與年輕乳腺癌有關(guān)，未在相關(guān)文獻(xiàn)或BIC網(wǎng)站上查到，它們有可能是中國(guó)年輕乳腺癌特異性突變位