3-甲氧基苯甲醛左氧氟沙星酰腙誘導人肝癌Hep3B細胞凋亡的作用機制研究.pdf

1、喹諾酮類藥物是臨床常用的抗菌藥物。研究表明，經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造的喹諾酮類化合物可作用于真核細胞的DNA拓撲異構(gòu)酶II（TopoisomeraseII，TopoII），抑制DNA復制和細胞增殖，誘導細胞凋亡，具有較強的抗腫瘤活性。因此，新型喹諾酮類藥物可能成為極具希望的抗腫瘤藥物。肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中居第三位，僅次于胃癌和食管癌，且發(fā)病率有上升趨勢，全世界每年平均有25萬人死于肝癌，而我國占其中的45％。由

2、于肝癌對臨床應用的很多化療藥物不敏感，化療效果較差，尋找高效，低毒的化療藥物成為抗癌藥物研發(fā)的重點。本文利用課題組自行設計改造和合成的喹諾酮類衍生物，對人肝癌Hep3B 細胞株增殖抑制和凋亡作用進行初步研究，為該類藥物的研發(fā)提供一定的理論依據(jù).
　　 目的：通過對12種喹諾酮衍生物的初步篩查，尋找對人肝癌Hep3B 細胞增殖有顯著抑制作用的化合物，對其作用機制進行初步研究，為該類化合物的開發(fā)利用提供依據(jù)。
　　 方法：M

3、TT法進行藥物初步篩查，計算細胞生長抑制率及IC50（半數(shù)抑制率）值，并且繪制隨藥物濃度變化的細胞增殖抑制曲線；熒光Hoechst33258染色觀察Hep3B細胞的細胞核形態(tài)學變化；利用TUNEL檢測并計算凋亡率；DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡特異性梯狀DNA條帶；Western-blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白和細胞周期蛋白表達的變化。
　　 結(jié)果：12種喹諾酮類化合物對人肝癌細胞株細胞Hep3B增殖的作用，結(jié)果顯示QNT8、QNT

4、10和QNT11三種化合物具有顯著的細胞增殖抑制作用，其中QNT11（3-甲氧基苯甲醛左氧氟沙星酰腙(S)-N-(3,4,5-三甲氧苯甲叉基)-6-氟-1,8-(2,1-氧丙基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-酰肼）在2.5 μmol·L-1 ～ 20μmol·L-1的濃度范圍內(nèi)能顯著抑制肝癌細胞增殖，呈濃度、時間依賴關(guān)系。QNT11對Hep3B作用24h的IC50值為14.17μmol·L-1,48h的IC5

5、0值為7.67μmol·L-1,72h的IC50值約為5.03μmol·L-1。Hoechst 33258染色觀察細胞凋亡形態(tài)學變化顯示藥物處理組凋亡細胞明顯增多，表現(xiàn)為染色質(zhì)凝集，細胞核碎裂等典型細胞凋亡特征性變化。瓊脂糖凝膠電泳可見凋亡細胞典型的梯狀DNA條帶，而對照組細胞基因組DNA完整。TUNEL實驗結(jié)果顯示，隨著QNT11作用濃度的增加，凋亡的細胞比率隨之增多，且呈劑量依賴性，與對照組相比均有顯著性差異（p<0.05）。Wes

6、tern-blot 結(jié)果顯示，Bax、Caspase-9、Caspase-3、Caspase-8蛋白表達量高于對照組，Bcl-2蛋白表達量降低。Caspase-9、Caspase-3活性裂解片段顯著增加，細胞色素c蛋白在細胞漿中顯著增加，在線粒體中明顯減少，細胞周期蛋白CDK1、CyclinB1表達降低，并且呈明顯的濃度依賴關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 1.QNT11具有抑制Hep3B 細胞增殖，阻滯細胞周期G2/M 進程