對(duì)甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙誘導(dǎo)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡的作用.pdf

1、目的：通過篩查10種喹諾酮類衍生物，選擇一種對(duì)人肝癌SMMC-7721 細(xì)胞增殖有顯著抑制作用的化合物，對(duì)其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用及可能的信號(hào)通路進(jìn)行初步研究，為該類化合物開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：MTT法對(duì)10種喹諾酮類衍生物進(jìn)行初步篩查；流式細(xì)胞術(shù)PI 單色標(biāo)記法檢測細(xì)胞周期的改變；Hoechst 33258/PI染色法熒光顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)；瓊脂糖凝膠電泳檢測細(xì)胞凋亡DNA 梯狀條帶；TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡率；

2、高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞線粒體膜電位（?Ψm）變化；Western blot 檢測Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、p53、Bcl-2和BaX蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：對(duì)10種氟喹諾酮酰腙類化合物（FQ1～FQ10）細(xì)胞增殖作用篩查結(jié)果顯示，化合物FQ3、FQ8和FQ10 對(duì)人肝癌SMMC-7721 細(xì)胞增殖均有抑制作用，其中對(duì)甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙（FQ10）對(duì)細(xì)胞增殖抑制率最高，在0.6

3、25 μmol·L-1 濃度，作用24h 細(xì)胞增殖抑制率與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05），在1.25μmol·L-1～10μmol·L-1的濃度范圍，細(xì)胞增殖抑制率更為顯著（P<0.01）。作用24 h的IC50值達(dá)4.40μmol·L-1，且呈濃度和時(shí)間依賴性；細(xì)胞周期檢測顯示，隨著FQ10 濃度的增加，G0/G1期細(xì)胞減少，S 期增加，細(xì)胞周期阻滯在G2/M 期；熒光染色觀察細(xì)胞核形態(tài)變化顯示，不同濃度的FQ10 作用于細(xì)胞

4、后，凋亡細(xì)胞增加并可見染色質(zhì)凝集、細(xì)胞核碎裂成碎片等典型細(xì)胞凋亡特征性變化。TUNEL法計(jì)量結(jié)果顯示，隨著FQ10 作用濃度的增加，凋亡率增高，呈劑量依賴性，實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)藥物處理組細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組（P﹤0.05），瓊脂糖凝膠電泳顯示，F(xiàn)Q10 作用濃度達(dá)10 μmol·L-1 時(shí)出現(xiàn)凋亡細(xì)胞典型的梯狀DNA條帶；Western blot 檢測結(jié)果顯示，不同濃度FQ10 藥物處理組的p53、Bax、Caspase-9和Caspase-3