不同葡萄糖濃度對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)中自噬的影響.pdf

1、目的：觀察不同葡萄糖濃度對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)中自噬的影響
　　 方法：體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，用0.125％胰蛋白酶分離乳鼠心室肌細(xì)胞，并用差速貼壁分離法和5-溴脫氧尿嘧啶(Brdu)純化心肌細(xì)胞；培養(yǎng)24小時(shí)后，進(jìn)行分組。分四組如下：L組：即對(duì)照組，葡萄糖(5.5mmol/L)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞；H組：即高糖組，葡萄糖(25mmol/L)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞；LR組：即對(duì)照+自噬誘導(dǎo)劑組(雷帕霉素100nm/L)；HR組：即高糖+自噬誘導(dǎo)劑

2、組(雷帕霉素100nm/L)。通過光鏡觀察和鑒定心肌細(xì)胞，計(jì)算各組心肌細(xì)胞面積；用RT-PCR檢測(cè)心肌肥大標(biāo)記基因[ANP(atrial natriuretic peptid，心房利鈉肽)、β-MHC(β-myosin heavy chain，β-肌球蛋白重鏈)]和自噬相關(guān)基因(Beclin-1)表達(dá)情況；運(yùn)用Western blotting檢測(cè)自噬標(biāo)記性蛋白微管相關(guān)蛋白3(LC-3)的表達(dá)，并比較不同葡萄糖濃度下自噬水平的差異。采用B

3、andscan5.0對(duì)PCR條帶進(jìn)行光密度測(cè)定，采用Sigma Scan Pro5軟件對(duì)Westernblotting印跡條帶進(jìn)行光密度測(cè)定。所有數(shù)據(jù)采用SSPS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：心肌細(xì)胞面積檢測(cè)、RT-PCR及Western blotting結(jié)果均顯示：
　　 1、高糖組心肌細(xì)胞肥大相關(guān)指標(biāo)(心肌細(xì)胞面積、ANP和β-MHC基因表達(dá))較對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

4、P<0.05)；高糖組自噬相關(guān)指標(biāo)(beclin-1基因表達(dá)和LC-3表達(dá))較對(duì)照組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、高糖+自噬誘導(dǎo)劑組心肌細(xì)胞肥大相關(guān)指標(biāo)較對(duì)照+自噬誘導(dǎo)劑組升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高糖+自噬誘導(dǎo)劑組自噬相關(guān)指標(biāo)較對(duì)照+自噬誘導(dǎo)劑組減低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、高糖+自噬誘導(dǎo)劑組心肌細(xì)胞肥大相關(guān)指標(biāo)較高糖組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高糖+自噬誘導(dǎo)劑組自噬相關(guān)指標(biāo)較高糖組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、
　　 4、對(duì)照+自噬誘導(dǎo)劑組的心肌細(xì)胞肥大相關(guān)指標(biāo)較對(duì)照組減低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照+自噬誘導(dǎo)劑組的自噬相關(guān)指標(biāo)較對(duì)照組升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、培養(yǎng)基中葡萄糖濃度升高可導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大，同時(shí)合并有心肌細(xì)胞自噬水平的下降。
　　 2、在高糖培養(yǎng)基中加入自噬誘導(dǎo)劑可升高心肌細(xì)胞的自噬水平，同時(shí)抑制高糖導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大效果。
　　 3、培養(yǎng)基中葡萄糖濃度升高導(dǎo)致心肌細(xì)胞