舒洛地特對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟HPA,b-FGF表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 微量蛋白尿的出現(xiàn),在糖尿病患者中意味著糖尿病腎病(DN)的到來,蛋白尿不僅是DN的臨床表現(xiàn),更是加速其進(jìn)展的主要原因。由多孔的內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球基底膜(GBM)、足細(xì)胞及其相鄰足突之間的裂孔隔膜共同構(gòu)成腎小球?yàn)V過膜的機(jī)械和電荷屏障,在蛋白尿的形成中起著重要作用。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)是糖胺聚糖的一種,是構(gòu)成GBM及系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的生物大分子物質(zhì),乙酰肝素酶(Heparanase,HPA)

2、是一種能降解HSPGs側(cè)鏈硫酸乙酰肝素HS的內(nèi)源性β-葡糖醛酸內(nèi)切酶,從而改變HSPGs在GBM及ECM上表達(dá)分布,破壞GBM的電荷屏障使濾過功能受損。DN的發(fā)病機(jī)制,除了公認(rèn)的高脂高糖、腎小球高血流動(dòng)力學(xué)、腎素-腎素血管緊張素系統(tǒng)的激活、氧自由基的損傷及非酶糖激化作用等影響因素外,近年來有學(xué)者發(fā)現(xiàn),在有微量蛋白尿的DN患者的的尿液中檢測到伴隨有HPA、HS的出現(xiàn),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在DN患者的腎臟組織GBM中有HPA的高表達(dá)伴隨基底膜H

3、S染色減少,DN蛋白尿的形成是否與腎臟組織蛋白HPA的表達(dá)有關(guān),成為近年來研究的熱點(diǎn)。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過鏈脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,觀察HPA、b-FGF在STZ腎病大鼠腎組織的表達(dá),進(jìn)一步探討蛋白尿發(fā)生的機(jī)制,并用舒洛地特干預(yù),通過生化、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、免疫組織化學(xué)等一系列檢測方法,進(jìn)而闡明舒洛地特的作用機(jī)制,為其在減少DN蛋白尿方面的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法
　　 4周齡SD雄性大鼠70只,適應(yīng)性喂養(yǎng)

4、一周,隨機(jī)分為對(duì)照組(n=20)和DN組(n=50)。DN組一次性給予0.1mmol／L濃度的鏈脲佐菌素配制液(STZ60mg／kg)腹腔注射,72h后連續(xù)3天檢測血糖,當(dāng)血糖大于16.6mmol／L,24h尿量大于對(duì)照組尿量的1.5倍,是為造模成功。對(duì)照組等劑量腹腔注射鏈脲佐菌素緩沖液。造模成功后,DN治療組予以舒洛地特(10mg／kg.d)腹腔注射共8周；對(duì)照組、模型組按等劑量生理鹽水腹腔注射共8周。實(shí)驗(yàn)期間,動(dòng)物自由飲食飲水,未使

5、用胰島素及其他降糖藥。4周末及8周末每組分別處死10只大鼠。測定24h尿蛋白定量及血生化指標(biāo)；取腎臟,行腎組織病理學(xué)檢查,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測HPA在腎臟組織表達(dá)；免疫組織化學(xué)方法檢測b-FGF在腎臟組織的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.模型組、治療組24h尿蛋白排泄量在4周末及8周末均較對(duì)照組明顯升高(P<0.05),治療組尿蛋白排泄量較模型組明顯降低(P<0.05)；模型組血清白蛋白水平在4周

6、末及8周末均較對(duì)照組、治療組明顯降低(P<0.05),治療組血清白蛋白水平在4周末及8周末與對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組、治療組大鼠腎比重(腎重／體重)較對(duì)照組明顯升高(P<0.05),治療組大鼠腎比重較模型組明顯降低(P<0.05)；模型組大鼠血Cys-C水平較治療組、對(duì)照組明顯升高(P<0.05),治療組血Cys-C水平與對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.大鼠腎組織的病理學(xué)改變:對(duì)照組腎臟組織病理大致正常；4

7、周末,模型組可見腎比重、腎小球體積明顯增大,細(xì)胞外基質(zhì)增多,基底膜增厚,延續(xù)至8周末出現(xiàn)腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化；治療組與模型組相比,腎臟組織病理改變明顯減輕。
　　 3.逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈反應(yīng)結(jié)果示:HPA mRNA在對(duì)照組大鼠腎臟有微弱的表達(dá),模型組4周末有較高的表達(dá),并持續(xù)至8周末,治療組4、8周末HPA mRNA表達(dá)較模型組明顯降低。
　　 4.免疫組化結(jié)果:對(duì)照組中,HPA、b-FGF在腎小球、腎小管間質(zhì)均有弱的表達(dá)

8、,模型組4周末HPA、b-FGF在腎組織的表達(dá)明顯升高,并一直延續(xù)至8周末；治療組HPA、b-FGF在腎組織的表達(dá)較模型組明顯降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.隨著鏈脲佐菌素DN進(jìn)展,大鼠腎小球、腎小管腎間質(zhì)HPA、b-FGF表達(dá)顯著升高,提示HPA、b-FGF表達(dá)升高可能是鏈脲佐菌素DN大鼠尿蛋白產(chǎn)生的重要因素之一。
　　 2.舒洛地特干預(yù)后,DN大鼠尿蛋白明顯減少,其作用機(jī)制可能與下調(diào)腎組織HP