舒洛地特對糖尿病腎病大鼠腎臟HPA,b-FGF表達的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 微量蛋白尿的出現(xiàn),在糖尿病患者中意味著糖尿病腎病(DN)的到來,蛋白尿不僅是DN的臨床表現(xiàn),更是加速其進展的主要原因。由多孔的內(nèi)皮細胞、腎小球基底膜(GBM)、足細胞及其相鄰足突之間的裂孔隔膜共同構成腎小球濾過膜的機械和電荷屏障,在蛋白尿的形成中起著重要作用。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)是糖胺聚糖的一種,是構成GBM及系膜區(qū)細胞外基質(zhì)(ECM)的生物大分子物質(zhì),乙酰肝素酶(Heparanase,HPA)

2、是一種能降解HSPGs側鏈硫酸乙酰肝素HS的內(nèi)源性β-葡糖醛酸內(nèi)切酶,從而改變HSPGs在GBM及ECM上表達分布,破壞GBM的電荷屏障使濾過功能受損。DN的發(fā)病機制,除了公認的高脂高糖、腎小球高血流動力學、腎素-腎素血管緊張素系統(tǒng)的激活、氧自由基的損傷及非酶糖激化作用等影響因素外,近年來有學者發(fā)現(xiàn),在有微量蛋白尿的DN患者的的尿液中檢測到伴隨有HPA、HS的出現(xiàn),進一步研究發(fā)現(xiàn),在DN患者的腎臟組織GBM中有HPA的高表達伴隨基底膜H

3、S染色減少,DN蛋白尿的形成是否與腎臟組織蛋白HPA的表達有關,成為近年來研究的熱點。
　　 本實驗通過鏈脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,觀察HPA、b-FGF在STZ腎病大鼠腎組織的表達,進一步探討蛋白尿發(fā)生的機制,并用舒洛地特干預,通過生化、逆轉錄聚合酶鏈反應、免疫組織化學等一系列檢測方法,進而闡明舒洛地特的作用機制,為其在減少DN蛋白尿方面的臨床應用提供理論依據(jù)。方法
　　 4周齡SD雄性大鼠70只,適應性喂養(yǎng)

4、一周,隨機分為對照組(n=20)和DN組(n=50)。DN組一次性給予0.1mmol／L濃度的鏈脲佐菌素配制液(STZ60mg／kg)腹腔注射,72h后連續(xù)3天檢測血糖,當血糖大于16.6mmol／L,24h尿量大于對照組尿量的1.5倍,是為造模成功。對照組等劑量腹腔注射鏈脲佐菌素緩沖液。造模成功后,DN治療組予以舒洛地特(10mg／kg.d)腹腔注射共8周；對照組、模型組按等劑量生理鹽水腹腔注射共8周。實驗期間,動物自由飲食飲水,未使

5、用胰島素及其他降糖藥。4周末及8周末每組分別處死10只大鼠。測定24h尿蛋白定量及血生化指標；取腎臟,行腎組織病理學檢查,采用逆轉錄聚合酶鏈反應、免疫組織化學技術檢測HPA在腎臟組織表達；免疫組織化學方法檢測b-FGF在腎臟組織的表達。
　　 結果:
　　 1.模型組、治療組24h尿蛋白排泄量在4周末及8周末均較對照組明顯升高(P<0.05),治療組尿蛋白排泄量較模型組明顯降低(P<0.05)；模型組血清白蛋白水平在4周

6、末及8周末均較對照組、治療組明顯降低(P<0.05),治療組血清白蛋白水平在4周末及8周末與對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義；模型組、治療組大鼠腎比重(腎重／體重)較對照組明顯升高(P<0.05),治療組大鼠腎比重較模型組明顯降低(P<0.05)；模型組大鼠血Cys-C水平較治療組、對照組明顯升高(P<0.05),治療組血Cys-C水平與對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義。
　　 2.大鼠腎組織的病理學改變:對照組腎臟組織病理大致正常；4

7、周末,模型組可見腎比重、腎小球體積明顯增大,細胞外基質(zhì)增多,基底膜增厚,延續(xù)至8周末出現(xiàn)腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化；治療組與模型組相比,腎臟組織病理改變明顯減輕。
　　 3.逆轉錄聚合鏈反應結果示:HPA mRNA在對照組大鼠腎臟有微弱的表達,模型組4周末有較高的表達,并持續(xù)至8周末,治療組4、8周末HPA mRNA表達較模型組明顯降低。
　　 4.免疫組化結果:對照組中,HPA、b-FGF在腎小球、腎小管間質(zhì)均有弱的表達

8、,模型組4周末HPA、b-FGF在腎組織的表達明顯升高,并一直延續(xù)至8周末；治療組HPA、b-FGF在腎組織的表達較模型組明顯降低(P<0.05)。
　　 結論:
　　 1.隨著鏈脲佐菌素DN進展,大鼠腎小球、腎小管腎間質(zhì)HPA、b-FGF表達顯著升高,提示HPA、b-FGF表達升高可能是鏈脲佐菌素DN大鼠尿蛋白產(chǎn)生的重要因素之一。
　　 2.舒洛地特干預后,DN大鼠尿蛋白明顯減少,其作用機制可能與下調(diào)腎組織HP