間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)兔血管成形術(shù)后再狹窄作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探索經(jīng)G-CSF動(dòng)員后分離的外周血間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）移植對(duì)模型兔頸動(dòng)脈球囊成形術(shù)后再狹窄的作用及其可能機(jī)制。 方法：連續(xù)5天應(yīng)用G-CSF30μg/（kg·d）于兔腹壁皮下注射動(dòng)員骨髓MSCs，第6天采血，經(jīng)密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)兔外周血MSCs，流式細(xì)胞儀鑒定，體外擴(kuò)增，大量?jī)龃鎮(zhèn)溆?；移植前綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記。新西蘭大白兔60只隨機(jī)分為對(duì)照組（N=30）和移植組（N=30），以高脂喂養(yǎng)加氮?dú)?/p>

2、損傷構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化血管狹窄模型，模型構(gòu)建成功后實(shí)施右頸總動(dòng)脈球囊血管成形術(shù)。移植組于血管成形術(shù)后立即接受MSCs靜脈移植，對(duì)照組接受同體積無(wú)血清培養(yǎng)液注射。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于血管成形術(shù)后7、14、28天被處死（n=10），留取損傷血管組織及血標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定：結(jié)合計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)，Weigert彈力纖維染色法進(jìn)行血管形態(tài)學(xué)分析；免疫組織化學(xué)方法測(cè)定血管內(nèi)皮化程度及綠色熒光蛋白表達(dá)情況、平滑肌細(xì)胞凋亡情況；酶聯(lián)免疫免疫吸附法測(cè)定血

3、中C反應(yīng)蛋白（CRP）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的水平；同時(shí)測(cè)定球囊成形術(shù)前后肝、腎功能和心肌酶學(xué)變化。 結(jié)果： ①G-CSF動(dòng)員后可分離出外周血MSCs并能體外大量擴(kuò)增； ②攜帶GFP基因的腺病毒載體感染MSCs可對(duì)其進(jìn)行有效標(biāo)記； ③與對(duì)照組相比較，移植組血中VEGF明顯增高，血管形態(tài)學(xué)檢查顯示移植組血管內(nèi)皮化面積增加，血管內(nèi)膜、中膜厚度及再狹窄率明顯下降； ④移植組有部分內(nèi)皮細(xì)胞為GFP