間充質干細胞移植對兔血管成形術后再狹窄作用的實驗研究.pdf

1、目的：探索經(jīng)G-CSF動員后分離的外周血間充質干細胞（MSCs）移植對模型兔頸動脈球囊成形術后再狹窄的作用及其可能機制。 方法：連續(xù)5天應用G-CSF30μg/（kg·d）于兔腹壁皮下注射動員骨髓MSCs，第6天采血，經(jīng)密度梯度離心法結合貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)兔外周血MSCs，流式細胞儀鑒定，體外擴增，大量凍存?zhèn)溆?；移植前綠色熒光蛋白（GFP）標記。新西蘭大白兔60只隨機分為對照組（N=30）和移植組（N=30），以高脂喂養(yǎng)加氮氣

2、損傷構建動脈粥樣硬化血管狹窄模型，模型構建成功后實施右頸總動脈球囊血管成形術。移植組于血管成形術后立即接受MSCs靜脈移植，對照組接受同體積無血清培養(yǎng)液注射。實驗動物分別于血管成形術后7、14、28天被處死（n=10），留取損傷血管組織及血標本進行相關指標測定：結合計算機病理圖像分析系統(tǒng)，Weigert彈力纖維染色法進行血管形態(tài)學分析；免疫組織化學方法測定血管內(nèi)皮化程度及綠色熒光蛋白表達情況、平滑肌細胞凋亡情況；酶聯(lián)免疫免疫吸附法測定血

3、中C反應蛋白（CRP）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的水平；同時測定球囊成形術前后肝、腎功能和心肌酶學變化。 結果： ①G-CSF動員后可分離出外周血MSCs并能體外大量擴增； ②攜帶GFP基因的腺病毒載體感染MSCs可對其進行有效標記； ③與對照組相比較，移植組血中VEGF明顯增高，血管形態(tài)學檢查顯示移植組血管內(nèi)皮化面積增加，血管內(nèi)膜、中膜厚度及再狹窄率明顯下降； ④移植組有部分內(nèi)皮細胞為GFP