骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、脊髓損傷（Spinal Cord Injury，SCI）的治療是世界醫(yī)學(xué)界一大難題。脊髓損傷后神經(jīng)元無法依靠自身再生修復(fù)，軸突再生困難，同時(shí)神經(jīng)膠質(zhì)瘢痕阻礙再生軸突的通過，因此脊髓損傷后減少神經(jīng)細(xì)胞壞死，促進(jìn)軸突再生，減少膠質(zhì)瘢痕的形成是臨床治療的關(guān)鍵。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞因其取材方便，培養(yǎng)簡單，并可以自體移植，無免排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，并且可以在體內(nèi)或體外特定的條件下轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞，植入損傷的脊髓組織后，能減輕神經(jīng)功能的缺損程度，促進(jìn)神經(jīng)功能的

2、恢復(fù)，故有望成為臨床上脊髓損傷治療的一種新方法。
　　 本課題主要研究內(nèi)容包括三個(gè)部分：
　　 1.定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 2.不同誘導(dǎo)劑對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的影響。
　　 3.移植定向誘導(dǎo)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 第一部分：定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 [目的]：建立一套系統(tǒng)的體外分離、培養(yǎng)及誘

3、導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的方法。
　　 [方法]：采用人淋巴細(xì)胞分離液從骨髓中分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增后，加以復(fù)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)期間觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，并通過免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定誘導(dǎo)細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況。
　　 [結(jié)果]：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增后，經(jīng)復(fù)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)48h，部分細(xì)胞出現(xiàn)胞體收縮和突起伸出，呈現(xiàn)神經(jīng)元細(xì)胞樣改變。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示nestin或NF陽性，

4、GFAP陰性。
　　 [結(jié)論]：本實(shí)驗(yàn)中體外分離培養(yǎng)的人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)無毒的復(fù)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑作用，在較短的時(shí)間內(nèi)獲得了足量的神經(jīng)元樣細(xì)胞，從而建立了一套系統(tǒng)的體外分離、培養(yǎng)及誘導(dǎo)人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。
　　 第二部分：不同誘導(dǎo)劑對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的影響。
　　 [目的]：尋找一種較為理想的誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的誘導(dǎo)劑及方法。
　　 [方法]：采用人淋巴細(xì)胞分離液從骨髓中分

5、離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增后，以不同組合的復(fù)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑加以誘導(dǎo)，誘導(dǎo)期間觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，通過免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定誘導(dǎo)細(xì)胞的分化情況，并用SPSS10.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 [結(jié)果]：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在加入不同組合的復(fù)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑后，均出現(xiàn)了胞體收縮、突起伸出的神經(jīng)元樣改變。免疫組化結(jié)果顯示，nestin、NF出現(xiàn)了不同的陽性率，其中以E組陽性率最高nestin (5.653±1.228)%，NF(74.724±3

6、.651)%，GFAP免疫組化染色均呈陰性，SPSS10.0分析顯示各誘導(dǎo)組之間差異具有顯著性意義（P<0.05）。
　　 [結(jié)論]：本實(shí)驗(yàn)探索出一種較為理想的誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的復(fù)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑及方法。
　　 第三部分：移植定向誘導(dǎo)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 [目的]：研究脊髓損傷后植入定向誘導(dǎo)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是否有助于動(dòng)物功能的恢復(fù)及不同植入時(shí)間對(duì)其是否存在影響。

7、r>　　 [方法]：SD大鼠36只，制成脊髓損傷模型并隨機(jī)分為A、B、C三組，A組于脊髓損傷后立即進(jìn)行細(xì)胞移植，B組于損傷后1周進(jìn)行細(xì)胞移植，C組作為對(duì)照組觀察。在脊髓損傷后的1～6周，對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行BBB評(píng)分，應(yīng)用SPSS12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并通過免疫熒光技術(shù)檢測Brdu標(biāo)記細(xì)胞的存活及與宿主脊髓的整合情況。
　　 [結(jié)果]：B組動(dòng)物的BBB評(píng)分提高顯著，較其它兩組具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組免疫熒光顯示，移植細(xì)胞大量存活并