骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、脊髓損傷（Spinal Cord Injury，SCI）的治療是世界醫(yī)學界一大難題。脊髓損傷后神經(jīng)元無法依靠自身再生修復，軸突再生困難，同時神經(jīng)膠質(zhì)瘢痕阻礙再生軸突的通過，因此脊髓損傷后減少神經(jīng)細胞壞死，促進軸突再生，減少膠質(zhì)瘢痕的形成是臨床治療的關(guān)鍵。骨髓間充質(zhì)干細胞因其取材方便，培養(yǎng)簡單，并可以自體移植，無免排斥反應(yīng)等優(yōu)點，并且可以在體內(nèi)或體外特定的條件下轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細胞，植入損傷的脊髓組織后，能減輕神經(jīng)功能的缺損程度，促進神經(jīng)功能的

2、恢復，故有望成為臨床上脊髓損傷治療的一種新方法。
　　 本課題主要研究內(nèi)容包括三個部分：
　　 1.定向誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)元的實驗研究。
　　 2.不同誘導劑對骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元分化的影響。
　　 3.移植定向誘導的人骨髓間充質(zhì)干細胞治療脊髓損傷的實驗研究。
　　 第一部分：定向誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元分化的實驗研究。
　　 [目的]：建立一套系統(tǒng)的體外分離、培養(yǎng)及誘

3、導人骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)元的方法。
　　 [方法]：采用人淋巴細胞分離液從骨髓中分離出骨髓間充質(zhì)干細胞，體外培養(yǎng)、擴增后，加以復合神經(jīng)誘導劑進行誘導，誘導期間觀察細胞形態(tài)的變化，并通過免疫細胞化學鑒定誘導細胞表面標志物的表達情況。
　　 [結(jié)果]：人骨髓間充質(zhì)干細胞在體外分離、培養(yǎng)、擴增后，經(jīng)復合神經(jīng)誘導劑誘導48h，部分細胞出現(xiàn)胞體收縮和突起伸出，呈現(xiàn)神經(jīng)元細胞樣改變。免疫細胞化學染色顯示nestin或NF陽性，

4、GFAP陰性。
　　 [結(jié)論]：本實驗中體外分離培養(yǎng)的人骨髓基質(zhì)干細胞，經(jīng)無毒的復合神經(jīng)誘導劑作用，在較短的時間內(nèi)獲得了足量的神經(jīng)元樣細胞，從而建立了一套系統(tǒng)的體外分離、培養(yǎng)及誘導人骨髓基質(zhì)干細胞的實驗方法。
　　 第二部分：不同誘導劑對骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元分化的影響。
　　 [目的]：尋找一種較為理想的誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)元的誘導劑及方法。
　　 [方法]：采用人淋巴細胞分離液從骨髓中分

5、離出骨髓間充質(zhì)干細胞，體外培養(yǎng)、擴增后，以不同組合的復合神經(jīng)誘導劑加以誘導，誘導期間觀察細胞形態(tài)的變化，通過免疫細胞化學鑒定誘導細胞的分化情況，并用SPSS10.0進行數(shù)據(jù)分析。
　　 [結(jié)果]：人骨髓間充質(zhì)干細胞在加入不同組合的復合神經(jīng)誘導劑后，均出現(xiàn)了胞體收縮、突起伸出的神經(jīng)元樣改變。免疫組化結(jié)果顯示，nestin、NF出現(xiàn)了不同的陽性率，其中以E組陽性率最高nestin (5.653±1.228)%，NF(74.724±3

6、.651)%，GFAP免疫組化染色均呈陰性，SPSS10.0分析顯示各誘導組之間差異具有顯著性意義（P<0.05）。
　　 [結(jié)論]：本實驗探索出一種較為理想的誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)元的復合神經(jīng)誘導劑及方法。
　　 第三部分：移植定向誘導的人骨髓間充質(zhì)干細胞治療脊髓損傷的實驗研究。
　　 [目的]：研究脊髓損傷后植入定向誘導的人骨髓間充質(zhì)干細胞是否有助于動物功能的恢復及不同植入時間對其是否存在影響。

7、r>　　 [方法]：SD大鼠36只，制成脊髓損傷模型并隨機分為A、B、C三組，A組于脊髓損傷后立即進行細胞移植，B組于損傷后1周進行細胞移植，C組作為對照組觀察。在脊髓損傷后的1～6周，對各組動物進行BBB評分，應(yīng)用SPSS12.0進行數(shù)據(jù)分析，并通過免疫熒光技術(shù)檢測Brdu標記細胞的存活及與宿主脊髓的整合情況。
　　 [結(jié)果]：B組動物的BBB評分提高顯著，較其它兩組具有明顯的統(tǒng)計學意義。B組免疫熒光顯示，移植細胞大量存活并