戊四氮點(diǎn)燃癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶改變與海馬神經(jīng)顆粒素的表達(dá)變化.pdf

1、目的：癲癇是一種腦部疾患，其特點(diǎn)是持續(xù)存在能產(chǎn)生癲癇發(fā)作的腦部持久性改變，并出現(xiàn)相應(yīng)的神經(jīng)生物學(xué)、認(rèn)知、心理學(xué)以及社會(huì)學(xué)等方面的后果。癲癇患者除癲癇發(fā)作外，常伴有注意力分散、學(xué)習(xí)記憶能力減退等認(rèn)知功能受損的表現(xiàn)，其中學(xué)習(xí)記憶能力減退是癲癇患者認(rèn)知障礙中最常見(jiàn)的癥狀。約有30％癲癇患者有認(rèn)知功能損害，20％～25％的患者有明顯障礙。嚴(yán)重者可影響工作、學(xué)習(xí)和生活質(zhì)量，并給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。認(rèn)知功能障礙已成為癲癇防治的重點(diǎn)之一。通過(guò)腹腔

2、注射戊四氮(pentylenetetrazole，PTZ)建立更加類(lèi)似臨床發(fā)作的慢性癲癇大鼠模型來(lái)觀(guān)察慢性點(diǎn)燃癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變，并運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western Blot以及免疫組織化學(xué)等方法觀(guān)察其海馬神經(jīng)顆粒素(neurogranin，Ng)的表達(dá)變化，探討Ng在癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙中的作用，為進(jìn)一步研究癲癇認(rèn)知功能障礙的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法：采用戊四氮腹腔注射慢性點(diǎn)燃癲癇(chronic e

3、pileptic，CEP)模型，選取經(jīng)Y迷宮篩選合格的清潔級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠100只，實(shí)驗(yàn)起始質(zhì)量(200±20)g，12h光亮/黑暗條件、22℃～25℃環(huán)境溫度，分籠喂養(yǎng)。隨機(jī)分為兩組：慢性癲癇發(fā)作組(chronic epileptic group，CEP組)60只，正常對(duì)照組(normal control group，NC組)40只。CEP組大鼠每日晨8:00～9:00腹腔注射PTZ 35mg/kg，連續(xù)

4、30天，每天注射完畢后觀(guān)察1小時(shí)。NC組大鼠給予同等劑量、同等次數(shù)的生理鹽水。依據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將大鼠行為分為6級(jí)。0級(jí)：無(wú)任何反應(yīng)；I級(jí)：胡須動(dòng)、面肌抽動(dòng)；Ⅱ級(jí)：點(diǎn)頭、咀嚼或濕狗樣抖動(dòng)(wet dog shakes,WDS)；Ⅲ級(jí)：一側(cè)前肢抬起、陣攣；Ⅳ級(jí)：站立伴有雙側(cè)前肢陣攣；V級(jí)：跌倒、全身強(qiáng)直陣攣性發(fā)作。完全點(diǎn)燃的標(biāo)準(zhǔn)是獲得連續(xù)3次Ⅳ級(jí)或以上的運(yùn)動(dòng)驚厥。實(shí)驗(yàn)第31天起選取完全點(diǎn)燃的CEP組和NC組大鼠各16只分別行Morr

5、is水迷宮和Y迷宮檢測(cè)，測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，記錄大鼠在Morris水迷宮中的逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)及在平臺(tái)象限的時(shí)間，記錄在Y迷宮中的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)及全天總反應(yīng)時(shí)間，然后各組大鼠均取8只運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法和WesternBlot方法分別測(cè)定大鼠海馬Ng mRNA和蛋白的水平變化，用免疫組織化學(xué)方法觀(guān)察Ng在海馬CAl區(qū)、CA3區(qū)的表達(dá)情況。結(jié)果：1 動(dòng)物模型制備CEP組大鼠在連續(xù)注射第6～10天起開(kāi)始出現(xiàn)凝視、

6、點(diǎn)頭、反復(fù)洗臉動(dòng)作、面部及頭部抽搐等，以后發(fā)作癥狀逐日加重，于給藥第18～24天全部出現(xiàn)全身肌陣攣、雙前肢抬起，最終發(fā)生全身強(qiáng)直.陣攣性發(fā)作，伴有跌倒、翻滾及流涎，達(dá)到RacineIV～V級(jí)的點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)，繼續(xù)給藥至30天。NC組動(dòng)物均無(wú)癲癇發(fā)作表現(xiàn)。 2.Morris水迷宮及Y迷宮檢測(cè)結(jié)果Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)：CEP組大鼠第1天逃避潛伏期與NC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0.05)，第2天高于NC組(P＜0.05)，第3天

7、仍高于NC組(P＜0.01)：空間探索試驗(yàn)：CEP組大鼠120s內(nèi)穿越平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)明顯低于NC組(P＜0.01)，在平臺(tái)所在象限的游泳時(shí)間與NC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Y迷宮檢測(cè)結(jié)果：CEP組與NC組比較大鼠的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)增多(P＜0.05)，但全天總反應(yīng)時(shí)間，兩組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3 大鼠海馬Ng mRNA和蛋白的表達(dá)CEP組大鼠海馬NgmRNA.相對(duì)吸光度值0.53±0.07，明顯低于NC

8、組0.74±0.04(P＜0.01)；CEP組大鼠海馬Yg蛋白的表達(dá)0.61±0.17低于NC組0.91±0.23(P＜0.05)。 4 Ng在海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的表達(dá)情況Ng的免疫反應(yīng)物呈棕褐色，主要位于海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的錐體細(xì)胞層神經(jīng)元的胞漿中。在CA1區(qū)CEP組Ng的免疫反應(yīng)強(qiáng)度較NC組弱(P＜0.05)，在CA3區(qū)兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1 戊四氮慢性點(diǎn)燃癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損，主要表現(xiàn)為M