戊四氮點(diǎn)燃模型大鼠海馬苔蘚纖維出芽與Cdk5-p35表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、目的:動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞周期素依賴性激酶5(Cdk5)及其活性調(diào)節(jié)亞基p35的mRNA和蛋白在戊四氮(PTZ)點(diǎn)燃模型大鼠海馬CAl、CA3區(qū)及齒狀回顆粒細(xì)胞層和門區(qū)的表達(dá)變化，結(jié)合苔蘚纖維出芽的動(dòng)態(tài)變化，探討其在癲癇發(fā)生中的作用。 方法:清潔級(jí)SD雄性成年大鼠120只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組和戊四氮組，戊四氮組連續(xù)腹腔注射PTZ 30mg／kg每天一次，對(duì)照組同時(shí)注射等體積生理鹽水。按戊四氮第一次給藥后3天、1周、2周、4周和6周在

2、兩組內(nèi)各隨機(jī)分為5個(gè)亞組。每個(gè)亞組再按實(shí)驗(yàn)方法分為兩個(gè)小組：一組用于免疫組化和原位雜交，檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)Cdk5／p35蛋白和mRNA在海馬CAl、CA3區(qū)、齒狀回顆粒細(xì)胞層和門區(qū)的表達(dá)；另一組用于Timm染色，檢測(cè)苔蘚纖維出芽情況，每個(gè)小組各6只。 結(jié)果: 1．動(dòng)物模型 大鼠多在連續(xù)注射PTZ 22~27天后被點(diǎn)燃，平均25.2±1.5天。模型點(diǎn)燃率為95.8％，死亡率為4.2％。達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)的大鼠，可見自發(fā)發(fā)作及

3、腦電圖癇性波，再次予相同閾下劑量PTZ刺激仍可誘發(fā)癇性發(fā)作和腦電圖癇性波；對(duì)照組未出現(xiàn)誘發(fā)發(fā)作及自發(fā)發(fā)作，腦電圖亦無(wú)癇性波。 2．苔蘚纖維出芽的動(dòng)態(tài)變化 與對(duì)照組相比，戊四氮組各時(shí)間點(diǎn)CA3區(qū)苔蘚纖維出芽評(píng)分均有顯著性差異。從3天起評(píng)分逐漸增加，2周時(shí)達(dá)高峰并維持至6周。齒狀回顆粒細(xì)胞上區(qū)苔蘚纖維出芽評(píng)分為O～1分，各時(shí)間點(diǎn)之間及與對(duì)照組之間比較均無(wú)顯著性差異。生理鹽水對(duì)照組苔蘚纖維出芽評(píng)分僅O～1分，各時(shí)間點(diǎn)間無(wú)顯著性

4、差異。 3．Cdk5／p35的動(dòng)態(tài)表達(dá) Cdk5／p35主要表達(dá)在海馬CAl、CA3區(qū)的錐體細(xì)胞、齒狀回顆粒細(xì)胞和門區(qū)神經(jīng)元中。戊四氮組大鼠上述各區(qū)c~5／p35 mRNA在3天時(shí)表達(dá)即有明顯上調(diào)，4周內(nèi)仍維持在較高水平，6周時(shí)基本恢復(fù)到對(duì)照組水平；各區(qū)Cdk5／p35蛋白表達(dá)從3天起即上調(diào)，逐漸增高，2周時(shí)最強(qiáng)，其后下調(diào)，至6周時(shí)接近或達(dá)到對(duì)照組水平。 4．Cdk5細(xì)胞內(nèi)分布的變化 對(duì)照組Cdk5 mR