TOLL樣受體4等信號分子對人氣道平滑肌細胞增殖及合成分泌功能影響的研究.pdf

1、目的: 支氣管哮喘(簡稱哮喘)是由多種細胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病,其以氣道重構(gòu)和氣道炎癥為主要特征。氣道重構(gòu)是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié),但其發(fā)病機制至今尚未完全明確。人氣道平滑肌細胞(Human airway smooth muscle cells,HASMCs)增生是氣道重構(gòu)的一個重要因素。最新研究發(fā)現(xiàn),HASMCs不僅具有增生肥大的功能,而且在細胞因子與炎癥介質(zhì)的共同刺激下能合成分泌其他炎癥介質(zhì),作為免疫細胞參與哮喘的發(fā)病過程。To

2、ll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)參與多種疾病過程,與哮喘密切相關(guān)。
　　我們擬通過建立人體體外被動致敏哮喘模型,觀察HASMCs在哮喘狀態(tài)下的增殖與分泌功能。通過檢測HASMCs的增殖反應(yīng)和分泌的細胞因子,更科學(xué)、全面地評價哮喘狀態(tài)下HASMCs的功能變化,以探討TLR4相關(guān)信號分子對HASMCs增殖和細胞因子合成分泌功能的影響。并且,嘗試探討傳統(tǒng)抗瘧中藥青蒿素與地塞米松對HASMCs TLR4、轉(zhuǎn)化

3、生長因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)表達及細胞增殖的影響以開拓哮喘中藥治療的新思路。
　　方法: 通過培養(yǎng)原代HASMCs,建立人體體外被動致敏哮喘模型,使用免疫細胞化學(xué)、MTT和ELISA等分子生物學(xué)技術(shù),用TNF-α、渥漫青霉素、PDTC和青蒿素等作為工具藥,探討TLR4、PI3K、NF-κB對HASMCs增殖與分泌合成功能的影響。
　　結(jié)果:
　　1.與正常對照組相

4、比,被動致敏組HASMCs增殖反應(yīng)明顯增加(P<0.01)、總蛋白合成量增高(P<0.01)和IgE的分泌水平明顯增高(P<0.01),成功建立了人體體外被動致敏哮喘模型。
　　2.與正常對照組相比,被動致敏組HASMCs分泌TGF-?1水平明顯增高,差異有顯著性(P<0.01)。
　　3.與正常對照組相比較,TNF-α組細胞增殖反應(yīng)明顯增加(P<0.01),TLR4明顯增高(P<0.01),TGF-?1含量明顯增高(P<0

5、.01)。
　　4.與正常對照組相比,TLR4抗體組TLR4表達明顯減少(P<0.01),細胞增殖反應(yīng)明顯減少(P<0.01),TGF-?1含量明顯降低(P<0.01)。
　　5.與正常對照組相比,TNF-α+渥漫青霉素組、TNF-α+PDTC組細胞增殖反應(yīng)明顯減少(P<0.01),TGF-?1含量明顯降低(P<0.01)。
　　6.與TNF-α+渥漫青霉素組、TNF-α+PDTC組相比,TNF-α+渥漫青霉素組+PD

6、TC組細胞增殖反應(yīng)明顯減少(P<0.05),TGF-?1含量明顯降低(P<0.05)。
　　7.與正常對照組相比,TNF-α+青蒿素組、TNF-α+地塞米松組TLR4表達明顯減少(P<0.01),細胞增殖反應(yīng)減少(P<0.05),TGF-?1含量明顯降低(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.被動致敏HASMCs過度增生、蛋白合成能力顯著增強和大量IgE的分泌,提示本實驗成功建立了人體體外被動致敏哮喘模型;微環(huán)境的顯著

7、改變,可能是導(dǎo)致氣道重建的重要因素之一。
　　2.HASMCs增生是氣道重構(gòu)的一個顯著特征。TNF-α能夠激活HASMCs表面TLR4并且上調(diào)其的表達,從而增強HASMCs的增殖和TGF-?1合成分泌功能。HASMCs的過度增殖和大量TGF-?1的釋放,可能是導(dǎo)致哮喘氣道重構(gòu)的病理學(xué)基礎(chǔ)之一。
　　3.TLR4抗體能夠抑制哮喘HASMCs的增殖和TGF-?1的合成分泌功能,可能具有逆轉(zhuǎn)或延緩哮喘氣道重構(gòu)的作用。
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