低劑量甲氨蝶呤通過阻斷NF-κB路徑抑制肝臟炎癥.pdf

1、許多所謂難治性疾病其實質是由炎癥所導致的機體組織損傷。乙型肝炎的發(fā)病機制,也是由于機體免疫系統(tǒng)引發(fā)的炎癥對肝細胞的損傷。巨噬細胞是機體免疫系統(tǒng)的重要細胞成份,分泌多種促炎因子并參與免疫應答。甲氨蝶呤(MTX)是一種葉酸拮抗劑,近來有研究表明,低劑量的MTX廣泛用于類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病的治療,在糖尿病腎病中亦有抗炎作用。
　　本文用刀豆蛋白A(conA)誘導小鼠急性肝炎,用0.5μg/gMTX處理之,可減輕小鼠肝損傷程度、

2、降低小鼠血清ALT的活性,并抑制肝臟kupffer細胞iNOS的mRNA表達。通過清除巨噬細胞及使用iNOS的抑制劑,亦可降低小鼠血清ALT活性;1.0ug/mlLPS和0.1ug/mlMTX共培養(yǎng)48小時的小鼠腹腔巨噬細胞,其培養(yǎng)上清中NO含量較低。體內(0.5μg/gMTX)和體外(0.1μg/mlMTX)實驗均表明,低劑量的MTX能抑制巨噬細胞iNOS的活性,減少NO的產生。單獨使用0.5μg/gMTX處理健康小鼠,小鼠并無肝損傷

3、。由此可知,低劑量的MTX(0.5μg/g)治療可在不產生肝毒性的情況下,通過抑制kupffer細胞的iNOS的活性,減少NO產生,防止肝損傷。
　　隨后本文深入研究,通過體外實驗證明低劑量的MTX(0.1μg/ml)能有效阻止受LPS(1.0ug/ml)刺激的巨噬細胞的NF-κB(p65)入核參與調控。并通過westernblot進一步證明,低劑量的MTX(0.1μg/ml)是通過抑制IκB的磷酸化及降解,來阻止NF-κB入核。

4、
　　隨后本文擴展研究,構建荷瘤小鼠模型,從接種腫瘤第3日起,每日腹腔注射MTX。低劑量的MTX(0.04μg/g)的治療能在一定程度上抑制腫瘤的生長;且停藥后小鼠存活時間較高濃度MTX治療組長。腫瘤細胞RT-PCR和ELISA結果均顯示,低劑量的MTX(0.04μg/g)治療組小鼠腫瘤組織的炎性細胞因子IL-6表達下調;westernblot結果也表明,低劑量的MTX(0.04μg/g)能有效抑制IκB的降解以阻斷NF-κB的核