低劑量甲氨蝶呤下調(diào)巨噬細(xì)胞iNOS表達(dá)抑制肝臟炎性損傷.pdf

1、目的:本文擬通過不同劑量甲氨蝶呤在小鼠炎癥模型中對一氧化氮的作用來探討低劑量甲氨蝶呤對免疫炎癥的影響。
　　 方法：1.用conA 尾靜脈注射昆明小鼠，各組分別用不同濃度的MTX 處理，48小時取脾細(xì)胞RNA，檢測IL-2、Fox-P3的表達(dá)；2、用LPS 刺激昆明小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，各組分別用不同濃度的MTX 處理，48 小時后檢測培養(yǎng)上清NO 含量，提取巨噬細(xì)胞RNA，檢測IL-2、Fox-P3的表達(dá)；3、建立conA 所致小

2、鼠急性肝炎模型，各組用不同濃度的MTX 處理，6 小時后檢測外周血轉(zhuǎn)氨酶活性；4、建立DH5α大腸桿菌所致小鼠感染模型，各組用不同濃度的MTX 處理，6 小時后取肝臟研磨培養(yǎng)，24 小時后觀察菌落生長情況；5、用CFSE 標(biāo)記BALB/C 小鼠脾臟T細(xì)胞后尾靜脈注入其他BALB/C 體內(nèi)，并用ConA和不同濃度的MTX處理，48 小時后取脾臟流式細(xì)胞術(shù)檢測CFSE 標(biāo)記的T細(xì)胞增值情況。6、清除小鼠肝臟巨噬細(xì)胞（kupffer cell

3、s），36 小時后建立conA 所致小鼠急性肝炎模型，6 小時后眼球取血，測血清中轉(zhuǎn)氨酶活性；7、建立conA 所致小鼠急性肝炎模型，用不同濃度的MTX 尾靜脈注射，6 小時候分離肝臟Kupper cells，RT-PCR檢測iNOS的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1、低劑量的MTX（0.1ug/ml）可以下調(diào)IL-2的表達(dá)和上調(diào)Fox-P3的表達(dá)；2、LPS 刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后，低劑量的MTX 更能有效地抑制巨噬細(xì)胞NO的產(chǎn)生；3、

4、在小鼠肝炎模型中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高，而低劑量MTX處理組轉(zhuǎn)氨酶活性降低，MTX 劑量加大后轉(zhuǎn)氨酶活性有所提升。4、在小鼠感染模型中，低劑量的MTX 促進(jìn)了細(xì)菌在肝臟的生長，而隨著劑量的加大，這種促進(jìn)作用有所減弱；5、低劑量的MTX 沒有看到明顯的抑制T細(xì)胞增值作用，而相對高劑量的MTX 產(chǎn)生了一定的抑制作用。6、未清除肝臟Kupper cells組轉(zhuǎn)氨酶較清除組明顯升高；7、低劑量的MTX 作用后所取的Kupper cells中iNO