慢病毒介導(dǎo)的人SLC2A9基因過表達(dá)對(duì)人近曲小管上皮細(xì)胞尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響.pdf

1、背景：腎臟尿酸結(jié)石是泌尿系結(jié)石中常見的類型，僅次于含鈣結(jié)石，約占泌尿系結(jié)石的10％-40%。尿酸結(jié)石的成石機(jī)制主要包括3個(gè)方面：尿pH值降低、尿量減少及高尿酸尿，其中高尿酸尿是誘發(fā)尿酸結(jié)石的關(guān)鍵因素之一。在人體，尿酸排泄主要是通過腎臟進(jìn)行代謝的。經(jīng)腎臟濾過的尿酸有90%被腎臟上皮細(xì)胞重吸收，只有10%的尿酸隨尿液排出體外。因而尿液中尿酸水平的高低取決于腎對(duì)尿酸的重吸收程度。近年來的研究表明SLC2A9基因編碼的GLUT9蛋白可以將尿酸吸

2、收至腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，從而調(diào)控尿酸的重吸收，并且已有多項(xiàng)人群基因篩查研究顯示出SLC2A9基因與尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性，因此，SLC2A9基因被認(rèn)為是尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)的一個(gè)重要的調(diào)控元件。本研究利用高效轉(zhuǎn)染的慢病毒作為載體構(gòu)建SLC2A9過表達(dá)質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染入永生化人腎臟近曲小管上皮細(xì)胞株HK-2中，驗(yàn)證SLC2A9基因過表達(dá)對(duì)尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響，同時(shí)為后期探討SLC2A9基因遺傳變異對(duì)尿酸結(jié)石的影響奠定基礎(chǔ)。
　　目的：將SL

3、C2A9基因載入慢病毒顆粒，探討SLC2A9基因過表達(dá)慢病毒顆粒感染人近曲小管上皮細(xì)胞HK-2后對(duì)其尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。
　　方法：PCR反應(yīng)擴(kuò)增目的基因后載入慢病毒表達(dá)載體中構(gòu)建重組載體pLEX-SLC2A9，使用PCR及測(cè)序的方法對(duì)其進(jìn)行鑒定，并與輔助包裝質(zhì)粒共感染293T細(xì)胞。慢病毒顆粒感染HK-2細(xì)胞后，用PCR和Western blot檢測(cè)SLC2A9基因的過表達(dá)效率，并檢測(cè)SLC2A9過表達(dá)對(duì)其尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。

4、r>　　結(jié)果：PCR及測(cè)序結(jié)果表明重組慢病毒載體pLEX-SLC2A9的插入序列完全正確，重組慢病毒載體感染 HK-2細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)的mRNA及蛋白水平增高，并且可以增強(qiáng)HK-2細(xì)胞對(duì)尿酸的轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建了pLEX-SLC2A9慢病毒表達(dá)載體，并證實(shí)了這一慢病毒轉(zhuǎn)染后SLC2A9基因的過表達(dá)可以顯著增強(qiáng)HK-2細(xì)胞的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力，為以后進(jìn)一步研究SLC2A9基因的功能、尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制及在尿酸結(jié)石形成過程中的作用奠定了基礎(chǔ)