游離脂肪酸對(duì)人近曲腎小管上皮細(xì)胞HK-2的影D.pdf

1、目的：為研究脂毒性對(duì)腎臟的損傷作用，我們利用游離脂肪酸（Free FattyAcids,FFAs）干預(yù)人近曲腎小管上皮細(xì)胞（HK-2），探討游離脂肪酸對(duì)人近曲腎小管上皮細(xì)胞的影響及作用機(jī)制。
　　 方法：用含有不同濃度（0、125、250、500μmol/L）軟脂酸的DMEM-F12 培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）,在0h、24h、48h 三個(gè)時(shí)段：①形態(tài)學(xué)觀察；②油紅O 染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)；③MTT 法檢測(cè)不同環(huán)境下FF

2、As對(duì)HK-2細(xì)胞增殖的影響；④流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FFAs對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響；⑤免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)處理前后HK-2細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、凋亡相關(guān)蛋白caspase8蛋白、及白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-8 （IL-8）表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：①HK-2細(xì)胞形態(tài) 正常HK-2細(xì)胞呈圓形貼壁細(xì)胞, 鋪滿(mǎn)后,細(xì)胞融合呈鵝卵石狀。經(jīng)FFAs作用后,HK-2細(xì)胞由圓形變?yōu)槔L(zhǎng)的梭形,細(xì)胞間的連接變松散。

3、②油紅O 染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積 軟脂酸干預(yù)組，48h后，HK-2細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)了非常清晰的紅染脂滴顆粒。而對(duì)照組HK-2細(xì)胞未見(jiàn)到紅染脂滴顆粒。③MTT 檢測(cè)HK-2細(xì)胞增殖 OD值隨著軟脂酸濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減小。三種不同劑量組之間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。相同濃度時(shí)，24 h與48h組間比較高、中劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05)，低劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）說(shuō)明軟脂酸抑制HK-2細(xì)胞增殖,并具有

4、劑量和時(shí)間依賴(lài)性趨勢(shì)。各軟脂酸組與對(duì)照組比較有顯著差異（P<0.01)，d-BSA組和正常培養(yǎng)液組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。④流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定結(jié)果 FFAs作用48h時(shí)采用雙標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，HK-2的凋亡率依次為5.86±1.39、9.61±0.82、12.3±1.19，與正常對(duì)照組2.23±0.92、d-BSA對(duì)照組2.64±1.02 相比差異顯著（P<0.05）。PI 單標(biāo)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，與對(duì)照組細(xì)胞相比，組G0/G1

5、比例增加，S 期比例降低，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)⑤細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果在正常對(duì)照組、d-BSA對(duì)照組培養(yǎng)，48h時(shí)，iNOS、caspase8、IL-1β、IL-8幾乎不表達(dá),兩對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。不同濃度的FFAs 處理HK-2細(xì)胞后，iNOS、caspase8、IL-1β、IL-8表達(dá)明顯增高，且具有濃度依賴(lài)趨勢(shì)，與正常對(duì)照組和d-BSA對(duì)照組比較，iNOS、IL-1β、IL-8中、高劑量組差異均有統(tǒng)