腺病毒介導(dǎo)的slit2 shRNA轉(zhuǎn)染缺氧誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞對(duì)VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　觀察腺病毒介導(dǎo)的slit2 shRNA轉(zhuǎn)染缺氧誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epithelial cells RPE)對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor VEGF)表達(dá)的影響，探討slit2在脈絡(luò)膜新生血管中的可能作用，為脈絡(luò)膜新生血管(CNV)的治療提供新的思路。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞，RT-PCR、免疫

2、組化鑒定slit2及其受體在人RPE上的表達(dá);
　　2.200μ mol/L氯化鈷建立化學(xué)缺氧模型，未缺氧細(xì)胞作為空白對(duì)照組，Real-TimePCR，western-blot觀察slit2及受體、VEGF在缺氧狀態(tài)下的表達(dá)變化;
　　3.將缺氧的RPE細(xì)胞隨機(jī)分為Ad-shRNA(加入slit2 shRNA)，Ad-nμ ll（加入空腺病毒）、缺氧組。24h后收取細(xì)胞，Real-TimePCR、western-blot分別

3、檢測(cè)各組slit2及其受體、VEGF的mRNA和蛋白水平表達(dá)變化，ELISA檢測(cè)上清中VEGF蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.在正常人RPE細(xì)胞，即有slit2及其受體Robo1、Robo4的表達(dá);
　　2.與空白對(duì)照組相比，缺氧組中slit2及其受體Robo1、VEGF的mRNA和蛋白水平的表達(dá)均明顯增加(P＜0.05);但受體R obo4無(wú)明顯變化;
　　3.與缺氧組相比，slit2 shRNA轉(zhuǎn)染后A