TIEG siRNA對(duì)AGEs介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞Smad信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：觀察TIEGsiRNA對(duì)AGEs介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞Smad信號(hào)通路的影響。 方法：(1)AGEs對(duì)體外培養(yǎng)正常大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)Smad信號(hào)通路的影響：體外培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞，無血清化24h后給予AGE-BSA或牛血清白蛋白(BSA)刺激24h和48h，收集細(xì)胞。采用免疫細(xì)胞化學(xué)、PCR和Westernblot的方法測(cè)定NRK52E細(xì)胞TIEGmRNA、Smad2和Smad7mRNA、Smad2和Sm

2、ad7蛋白表達(dá)水平。(2)TIEGsiRNA對(duì)AGEs介導(dǎo)NRK52E細(xì)胞Smad信號(hào)通路的影響：體外培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞，分別轉(zhuǎn)染psiRNA-TIEG和空載體，然后給予AGE—BSA刺激24h和48h，收集細(xì)胞，采用免疫細(xì)胞化學(xué)、PCR和Westernblot的方法測(cè)定轉(zhuǎn)染NRK52E細(xì)胞TIEGmRNA、Smad2和Smad7mRNA、Smad2和Smad7蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果： (1)AGEs以時(shí)間依賴方式上調(diào)T

3、IEGmRNA表達(dá)，48h達(dá)高峰；與刺激前和BSA對(duì)照組比較，刺激24h和48h明顯上調(diào)Smad2和Smad7mRNA和蛋白表達(dá)。 (2)siRNA—TIEG可有效下調(diào)AGEs介導(dǎo)的TIEGmRNA表達(dá)。與空載體比較，siRNA-TIEG可下調(diào)AGEs刺激24h和48h后Smad2mRNA和蛋白表達(dá)，上調(diào)Smad7mRNA和蛋白表達(dá)。 結(jié)論：AGEs可介導(dǎo)NRK52E細(xì)胞TIEGmRNA異常高表達(dá)，TIEG基因沉默通過下