空間誘變乳酸菌作為微生態(tài)制劑菌株的初步研究.pdf

1、空間誘變是一種新型的誘變方式,通過對嗜酸乳酸桿菌進行空間誘變育種,得到一株試驗菌株。本課題通過對此菌株的生理生化鑒定及對小鼠免疫學,腸道菌群功能改善的研究,得知它具有調節(jié)機體腸道微生態(tài)平衡的作用,在調節(jié)功效上與市售成熟產品合生元無明顯差異。
　　 本實驗首先對原有的培養(yǎng)基就誘變后菌株的生長情況應用旋轉正交方法作了模擬尋優(yōu)的調整。其次,對菌株的生理生化檢驗采用常規(guī)微生物檢驗方法,考察了誘變后乳酸菌的生長曲線、耐酸堿性、碳源利用、運

2、動性測定、半乳糖苷酶、氨基酸脫羧試驗、丙二酸鈉對照試驗等試驗反映了誘變后乳酸菌的生理生化特性。最后以腸道菌群檢測與免疫學巨噬細胞吞噬功能測定、溶血空斑試驗、淋巴細胞轉化試驗、NK(自然殺傷)細胞活性測定及細胞因子測定等方法,初步研究了空間誘變乳酸菌對小鼠腸道菌群及免疫功能的影響。在動物實驗中選擇昆明種小鼠,隨機分為5組,每組10只,即對照組、混合菌株組、誘變菌株組、合生元組,誘變前菌株組進行20天灌胃飼養(yǎng)。并進一步對模型小鼠的腸道菌群進

3、行分析。
　　 實驗結論如下:
　　 1)旋轉正交實驗模擬尋優(yōu)得到改良的培養(yǎng)基配方為:葡萄糖24.20g,蛋白胨12.36g,牛肉膏16.36g,酵母膏5g,吐溫-801mL,K2HPO42g,乙酸鈉5g,檸檬酸氫二銨2g,MgS04·7H2O0.2g,MnSO4·4H2O0.05g,加蒸餾水至1000mL。
　　 2)誘變后乳酸菌經染色觀察在形態(tài)上沒有發(fā)生改變,菌體大小與原菌株相近。KJ菌株同MIA一樣有運動性

4、；KJ菌株在O-硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷酶試驗中觀察反應為陽性；氨基酸脫羧敏試驗兩種菌株相同；碳源利用試驗中KJ菌株在乳糖利用試驗中呈陽性；在耐鹽性方面誘變后菌株KJ呈負突變。
　　 3)誘變前后兩株菌生長曲線可以看到,誘變后菌株比原菌株提前2h進入對數期,在對數生長期菌株生長速度大于誘變前菌株；誘變后乳酸菌耐酸性方面呈正突變。
　　 4)免疫學實驗中,誘變后菌株實驗組小鼠免疫器官胸腺指數和脾臟指數相對于原菌株有顯著提

5、高P<0.05;小鼠淋巴細胞轉化試驗中誘變后菌株也有顯著提高P<0.05;誘變組小鼠巨噬細胞吞噬能力也顯著提高P<0.05；NK細胞活性也有顯著提高P<0.05。
　　 5)細胞因子白細胞介素4和干擾素γ測定使用ELISA雙抗體夾心法試劑盒測定標準曲線,并用實驗組小鼠外周血清作樣本測定細胞因子含量,誘變后菌株組相比較原菌株都有顯著提高。
　　 6)腸道菌群分析試驗中,誘變菌組小鼠糞便中雙歧桿菌和乳桿菌明顯增加,產氣莢膜梭