脈安肽改善腦梗塞模型局部缺血及再通作用的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景與目的:脈安肽是一種新型直接凝血酶抑制劑，我們前期研究已證實(shí)其抑制微型豬股動脈球囊損傷后新生內(nèi)膜的形成，同時抑制血清炎癥因子的表達(dá)。而凝血酶在缺血性或出血性腦損傷中均起到了重要作用，凝血酶與蛋白酶激活受體相結(jié)合發(fā)揮神經(jīng)毒性作用。腦缺血病變主要通過活化凝血酶受體-1(protease-activated receptor-1，PAR-1)而發(fā)生神經(jīng)細(xì)胞的病理損傷。抑制PAR-1活化，可以減輕神經(jīng)細(xì)胞壞死，增加腦血流，改善腦缺血。根

2、據(jù)我們近期預(yù)初試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脈安肽抑制損傷局部新生內(nèi)膜中凝血酶受體的表達(dá)，我們設(shè)想脈安肽是否可以通過抑制凝血酶或PAR-1，減輕腦循環(huán)障礙后引發(fā)的腦組織病理變化，從而改善腦缺血，甚至使堵塞血管再通。因此，本研究旨在闡明直接凝血酶抑制劑脈安肽干預(yù)是否可以減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷，改善腦循環(huán)，并探討其作用機(jī)制，為治療腦梗塞提供新的理論與干預(yù)策略。在探討脈安肽的血管再通作用，我們采用血栓栓塞模型，通過上海光源同步輻射時效觀察治療效果。
　　研究方法:

3、1.建立小鼠大腦中動脈阻塞(middle cerebral arteryocclusion，MCAO)模型，分別給予脈安肽(4mg/kg)，低分子肝素鈣(3mg/kg)和對照組給予同等劑量的生理鹽水。干預(yù)后1天和3天，各組小鼠進(jìn)行旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)(rotarod test)測量運(yùn)動功能的恢復(fù);神經(jīng)功能損傷評分(neurological severity scores，NSS)觀察神經(jīng)功能的恢復(fù)情況，處焦油紫(cresyl violet)染色測定

4、梗死灶大小。PAR-1檢測用免疫組化法;Western blot分析PAR-1、CAT、Casp-3、Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá);MDA采用MDA試劑盒檢測含量。2.建立大鼠血栓栓塞模型，分別給予脈安肽(8mg/kg/h，4mg/kg/h，2mg/kg/h)，給藥后1小時內(nèi)，進(jìn)行血管成像，觀察治療作用。
　　研究結(jié)果:1.脈安肽改善小鼠大腦中動脈阻塞誘導(dǎo)的腦缺血作用:干預(yù)3天后，脈安肽、低分子肝素鈣治療組小鼠較生理鹽水組小鼠ro

5、tarodtest，NSS均有顯著改善，且腦梗死體積明顯下降(110.06±9.27 mm3，117.01±27.20mm3vs243.40±35.68mm3，P＜0.05)。PAR-1檢測發(fā)現(xiàn)脈安肽和低分子肝素鈣干預(yù)可抑制其表達(dá)，生理鹽水組，低分子肝素鈣組和脈安肽組分別是(2.03±0.28，1.74±0.46 vs1.47±0.2，P＜0.05)。脈安肽和低分子肝素鈣均能減少M(fèi)DA的產(chǎn)生，且提高CAT的水平表達(dá)，脈安肽的作用優(yōu)于低分

6、子肝素鈣。在細(xì)胞凋亡方面，脈安肽和低分子肝素鈣明顯降低Casp-3的表達(dá)，提高Bcl-2/Bax的比值，而生理鹽水沒有作用。干預(yù)1天的小鼠，脈安肽和低分子肝素鈣對腦缺血雖然有改善作用，但是和生理鹽水組的小鼠并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.脈安肽再通大鼠血栓栓塞血管:采用不同劑量分別為8mg/kg/h，4mg/kg/h和2mg/kg/h對血栓栓塞的腦缺血大鼠進(jìn)行干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)中劑量脈安肽可以使血管明顯再通，而且出血風(fēng)險最小。大劑量藥物干預(yù)后，出血現(xiàn)象