綠豆Aglycin的分離純化以及幾種豆類Aglycin基因的克隆.pdf

1、Aglycin是Chen等在研究胃腸道多肽激素時從豬小腸中分離并鑒定出的一個生物活性肽，分子量為3742.3D，含37個氨基酸，其中有6個半胱氨酸，分別位于3、7、15、20、22和32位。因氨基端為丙氨酸alanine，羧基端為甘氨酸glycine，故將其命名為Aglycin。經(jīng)生物信息學分析比對，Aglycin與豆類生物活性肽PA1b一級結構幾乎一致，與分離自黃豆的生物活性肽leginsulin同源性高達67％，且PA1b和legi

2、nsulin都能與共存于豆科植物中有類似受體蛋白性質(zhì)的7S球蛋白結合，在豆科植物生長發(fā)育中起作用。有意思的是，動物胰島素和胰島素樣生長因子也能和7S球蛋白結合，所以將這類蛋白統(tǒng)稱為豆類胰島素。
　　豆類胰島素不僅對植物的生長和發(fā)育有重要的作用，還能夠作為一種對人和動物無害的有效昆蟲毒劑，殺滅象鼻蟲等一系列害蟲，成為貯存糧食以及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的有前景的生物殺蟲劑，除此之外，豆類胰島素還對糖代謝有一定的調(diào)節(jié)作用，不僅能夠降低糖尿病小鼠空腹血

3、糖，改善胰島素敏感性，使糖耐量趨向正常，并且對動物體本身無毒副作用。因此豆類胰島素是一種對植物、昆蟲以及哺乳動物有著重要功能和意義的小分子生物活性肽，對它的研究也顯得尤為重要。綠豆種子蛋白含量很高，是人們主要的蛋白質(zhì)來源之一，它是是一種營養(yǎng)全面的食物，具有多重營養(yǎng)和保健功能。但目前對Aglycin的研究主要集中在豌豆和黃豆上，對綠豆Aglycin的研究較少。因此本實驗我們希望能純化出綠豆Aglycin，為其后期研究奠定基礎。
　　

4、本實驗希望根據(jù)前期分離和純化豌豆Aglycin蛋白的經(jīng)驗，來分離和純化綠豆Aglycin，以支持后期對不同豆類胰島素功能的研究。但在純化過程中并沒有分離出綠豆Aglycin，提示不同豆類中的Aglycin的分布和組織定位的不同可能導致其分離純化方法的不同，因此接下來，克隆出幾種豆類種子Aglycin的基因，并分析不同豆類種子胰島素基因的同源性，以期對豆類胰島素的基礎研究有所助益。
　　本實驗完成的工作主要有：
　　1.按照前

5、期純化豌豆Aglycin的方法，探索分離純化綠豆Aglycin的方法；
　　2.克隆出幾種豆類的Aglycin基因；
　　3.比較并分析了幾種豆類Aglycin基因以及氨基酸序列的差異和同源性。
　　研究結果顯示，不同豆類的Aglycin基因以及氨基酸序列之間雖有較高的同源性，但差異還是比較突出，這些差異可能導致了Aglycin在不同的豆類中的分布和組織定位有所不同，那么分離和純化它們的辦法可能就會不完全一樣。故而不同