腫瘤壞死因子凋亡相關(guān)配體基因的克隆、表達(dá)純化以及生物活性的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、腫瘤壞死因子相關(guān)配體屬于腫瘤壞死因子(TNF)家族,是繼TNFα,FasL之后新發(fā)現(xiàn)的具有介導(dǎo)細(xì)胞凋亡能力的存在于細(xì)胞表面的細(xì)胞因子配體,在多種組織和細(xì)胞中廣泛表達(dá)<'[2]>.和TNF家族的其他成員不同的是,TRAIL在體內(nèi)僅以膜結(jié)合型存在.我們以中國(guó)人外周血淋巴細(xì)胞總RNA為模板,擴(kuò)增TRAIL的胞外區(qū)(sTRAIL),插入原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,成功地表達(dá)了sTRAIL蛋白,并進(jìn)行了純化和初步的功能性研究,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下.

2、1.以正常人外周血淋巴細(xì)胞總RNA為模板,成功地?cái)U(kuò)增了TRAIL的胞外區(qū)cDNA,并克隆到原核表達(dá)載體中2.運(yùn)用PCR技術(shù)改造所獲得的cDNA片斷,針對(duì)所用表達(dá)載體在sTRAIL cDNA片斷5'和3'端分別設(shè)計(jì)并引入兩對(duì)酶切位點(diǎn)EcoRI和BamHI(pBV220載體)及NdeI和BamHI(pRSET-A載體),構(gòu)建了2個(gè)sTRAIL原核表達(dá)載體:pBV220/sTRAIL,pRSET-A/sTRAIL.3.分別通過(guò)用溫度和IPTG

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