桂花幼胚培養(yǎng)與俞傷組織誘導(dǎo)及分化.pdf

1、本研究選用‘大花金’桂(Osmamthusfragrans‘DahuaJin')、‘籽銀’桂(Osmanthusfragrans‘ZiYin')、‘籽丹’桂(Osmanthusfragrans‘ZiDan')三個(gè)品種作為實(shí)驗(yàn)材料，探索桂花幼胚離體培養(yǎng)、愈傷組織誘導(dǎo)和愈傷再分化的適宜條件，為構(gòu)建桂花再生體系積累經(jīng)驗(yàn)。
　　 在幼胚培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)外植體消毒時(shí)間、基本培養(yǎng)基種類、外源激素濃度和比例分別設(shè)計(jì)了不同梯度，探索幼胚適宜的萌發(fā)

2、條件。在生根實(shí)驗(yàn)中，對(duì)試管苗根部進(jìn)行不同程度斷根處理，探索根部損害、不同濃度的NAA對(duì)試管苗生根的影響。在煉苗移栽實(shí)驗(yàn)中使用河沙、蛭石、草炭土作為基質(zhì)，觀察不同基質(zhì)對(duì)試管苗的長(zhǎng)勢(shì)的影響。在愈傷組織誘導(dǎo)和愈傷再分化試驗(yàn)中，對(duì)接種方式、光照條件、外源激素的種類、濃度和比例等方面進(jìn)行不同設(shè)計(jì)，觀察這些因素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)和再分化的影響。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析。主要的研究結(jié)果如下：
　　 1.桂花3月中旬采集的未成熟種子

3、合適的升汞消毒時(shí)間是3min～6min。
　　 2.從萌發(fā)率和長(zhǎng)勢(shì)上看，B5培養(yǎng)基比MS培養(yǎng)基更適合幼胚培養(yǎng)?！蠡ń稹鸷线m的幼胚培養(yǎng)基是B5+GA(3mg/L)+6-BA(1mg/L)；‘籽銀’桂合適的幼胚培養(yǎng)基是B5+GA(2mg/L)+6-BA(2mg/L)；‘籽丹’桂合適的幼胚培養(yǎng)基是B5+GA(1mg/L)+6-BA(1.5mg/L)。
　　 3.切斷主根，并添加NAA(2mg/L)有利于促進(jìn)側(cè)根萌發(fā)。

4、>　　 4.幼葉腹面朝上和背面朝上兩種接種方式對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率沒(méi)有明顯影響。
　　 5.誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)初期經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的黑暗培養(yǎng)，對(duì)于提高愈傷組織誘導(dǎo)率和降低外植體褐化率效果明顯。光照對(duì)愈傷的增殖無(wú)明顯影響，對(duì)愈傷疏松程度也沒(méi)有明顯影響。光照能夠使愈傷產(chǎn)生較多綠色，黑暗條件下愈傷絕大多數(shù)為白色或者淺黃綠色。
　　 6.單獨(dú)添加6-BA或者單獨(dú)添加2，4-D都不利于幼葉誘導(dǎo)愈傷。同時(shí)添加6-BA和2，4-D能夠促進(jìn)愈傷增殖

5、，產(chǎn)生比添加6-BA和NAA更多的愈傷，產(chǎn)生的愈傷多數(shù)較疏松，失綠情況較重，培養(yǎng)超過(guò)50天后褐化情況嚴(yán)重。同時(shí)添加6-BA和NAA能夠促進(jìn)產(chǎn)生愈傷，產(chǎn)生的愈傷較致密，多數(shù)為淺綠色和綠色。比較適合‘籽銀’桂幼葉愈傷組織誘導(dǎo)的合適的培養(yǎng)基是MS+6-BA(2mg/L)+NAA(0.3mg/L)、MS+6-BA(3mg/L)+NAA(0.5mg/L)和MS+6-BA(5mg/L)+NAA(0.5mg/L)，愈傷組織誘導(dǎo)率在90％以上。