HBV感染者HBsAg和HBsAb同時(shí)陽(yáng)性的血清學(xué)異常模式的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　HBV感染呈現(xiàn)世界性流行，我國(guó)作為一個(gè)HBV高感染地區(qū)更應(yīng)該引起重視。亞洲感染者的基因型主要以B和C型為主，HBV突變性高于其他的DNA病毒。目前實(shí)驗(yàn)室常用方法學(xué)的敏感性由于HBV的基因變異的出現(xiàn)而面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。臨床方面也由于Pre-S/S基因突變給乙肝患者的治療判斷及預(yù)后帶來(lái)一系列的問(wèn)題。HbsAg作為HBV感染的標(biāo)志特性已經(jīng)存在多年，血清學(xué)檢測(cè)時(shí)表現(xiàn)為HBsAg和HBsAb同時(shí)存在或HBsAg陰性等情況的出現(xiàn)使得

2、人們對(duì)于HBV的免疫學(xué)診斷產(chǎn)生困惑。國(guó)內(nèi)外的學(xué)者對(duì)于HBVpre-S突變對(duì)于免疫逃避和隱匿性感染的影響的結(jié)論并不相同。相關(guān)突變數(shù)據(jù)報(bào)導(dǎo)主要來(lái)自于日本、中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)、韓國(guó)等東南亞地區(qū)，通常認(rèn)為免疫逃避產(chǎn)生的原因是“a”決定簇內(nèi)部的主要是G145R的突變。而在中國(guó)對(duì)于pre-S和S區(qū)基因突變研究數(shù)據(jù)不多。本研究的目的主要提供本地區(qū)HBV基因型和突變株流行病學(xué)數(shù)據(jù)，明確HBsAg和HBsAb同時(shí)陽(yáng)性慢性HBV感染者的異常血清學(xué)模式可能的機(jī)制，

3、分析Pre-S/S基因突變對(duì)實(shí)驗(yàn)診斷結(jié)果的影響和造成免疫逃避的原因并探討其臨床意義。
　　方法：
　　1.收集HbsA g、HbsAb同時(shí)陽(yáng)性的四種臨床異常的血清學(xué)榆測(cè)結(jié)果樣本，采用DNA定量檢測(cè)方法篩選HBVDNA陽(yáng)性的標(biāo)本，選取HBsAg陽(yáng)性HBsAb陰性的慢性乙肝患者作為對(duì)照組。
　　2.應(yīng)用高效病毒核酸提取收集血清的HBVDNA。
　　3.設(shè)計(jì)引物，利用PCR擴(kuò)增得到HBVpre-S/S擴(kuò)增產(chǎn)物，HBVp

4、re-S/S基因序列利用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法得到.
　　4.進(jìn)行S基因型分型，比較兩組PreS/S基因變異情況，結(jié)合臨床資料探討其臨床意義。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)于HBsAg和HBsAb檢測(cè)同時(shí)陽(yáng)性的標(biāo)本的測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)本中存在B基因型19例、c基因型41例，B基因型和c基因型的S區(qū)氨基酸突變率分別為10.8％和21.6％(F=24.31，P=0.046)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.
　　2.同樣為C基因型的兩組患者

5、，實(shí)驗(yàn)組s區(qū)氨基酸突變?yōu)?1.6％明顯多于對(duì)照組的氨基酸突變率3.2％(F=85.68，V=0.006)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.8例出現(xiàn)G145/K的突變，3例出現(xiàn)G145/A的突變，13例標(biāo)本中出現(xiàn)pre-S13'端大片段缺失突變株與野生型共同存在。
　　4.HBVpre-S功能位點(diǎn)缺失突變形成免疫逃逸，造成HBsAg和HBsAb檢測(cè)同時(shí)陽(yáng)性。
　　5.HBsAg和HBsAb檢測(cè)同時(shí)陽(yáng)性的實(shí)驗(yàn)組中AFP陽(yáng)性率為3

6、8.33％(23/60)明顯高于對(duì)照組中的11.67％(7/60)(F=43.86,P=0.031)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且C基因型AFP陽(yáng)性率43.9％(18/41)高于B基因型26.32％(5/19)，兩者比較(F=24.42，P=0.041)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HBsAg和HBsAb檢測(cè)同時(shí)陽(yáng)性的病毒感染模式會(huì)增加肝癌肝硬化的發(fā)生，且C基因型肝癌發(fā)生率高于B基因型的肝癌發(fā)生率。
　　結(jié)論：
　　1.由于HBV在體內(nèi)長(zhǎng)期免

7、疫壓力下，以及目前對(duì)于HBV的患者的治療下，乙肝耐藥性明顯增加，其突變率或混合感染不同病毒株的幾率可能略有增加，導(dǎo)致HBsAg和HBsAb雙陽(yáng)性的產(chǎn)生。
　　2.在HBsAg和HBsAb雙陽(yáng)性的感染者中，HBeAg可以陽(yáng)性或陰性，在本研究的對(duì)照組中也出現(xiàn)了部分S區(qū)點(diǎn)突變的情況，可能的原因?yàn)閿U(kuò)增過(guò)程中出現(xiàn)的突變。
　　3.HBsAg(+)HBsAb(+)并伴有HBeAg(+)的血清中HBV DNA的陽(yáng)性率明顯增高。
　　

8、4.HBsAg和HBsAb同時(shí)陽(yáng)性的現(xiàn)象與PreS/S區(qū)基因突變具有明顯的相關(guān)性，且C基因型的突變率高于B基因型的突變率。
　　5.HBsAg和HBsAb同時(shí)陽(yáng)性的現(xiàn)象與PreS/S區(qū)基因突變具有一定的相關(guān)性，HBV DNA陽(yáng)性的患者中出現(xiàn)的HBsAb不具有保護(hù)作用。
　　6.Pre-S/S基因突變及缺失可導(dǎo)致HbsAg血清學(xué)漏檢，造成臨床診斷失誤。
　　7.PreS/S區(qū)基因突變會(huì)提高肝癌及肝硬化的發(fā)生率，且C基因型