羅格列酮對正常和糖尿病家兔心室肌細胞L型鈣通道電流（I-,CaL-）在模擬低氧-復(fù)氧（缺血-再灌注）損傷條件下的干預(yù)作用.pdf

1、目的： 糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy，DC)與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary atherosclerotic heart disease，CAD)可能擁有共同的發(fā)病機制：胰島素抵抗(Insulin resistance，IR)、高糖血癥引起氧化應(yīng)激(oxidative stress)反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)皮功能不全，一氧化氮(NO)生成減少，從而產(chǎn)生動脈粥樣硬化(artherosclerosis

2、，AS)。糖尿病人尸檢報告證明其心肌細胞壞死比例高于正常人，與非糖尿病患者相比，前者中經(jīng)?？梢园l(fā)現(xiàn)存活心肌的收縮活性的繼續(xù)下降，也表明了糖尿病患者存在缺血預(yù)適應(yīng)(ischemic preconditioning，IR)損害。DC才能作為一個獨立體為人們重新認識。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisomeproliferator-activated receptor γ，PPARy)與配體結(jié)合后在基因轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。近年

3、來證實在心肌細胞上也存在PPARγ受體，PPARγ激動劑能縮小心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion)后心肌梗死面積，改善心臟功能。其具體機制還未闡明，目前已有許多實驗證明，羅格列酮(rosiglitazone)在其降糖機制以外亦可發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用，保護血管內(nèi)皮功能，改善血管平滑肌的離子流，這些可能與其心臟保護作用有關(guān)。目前，國內(nèi)外尚無氧化應(yīng)激條件下羅格列酮對心肌細胞離子流影響的相關(guān)研究。本研究可能為心肌缺血再灌注后

4、不良事件的預(yù)防提供一種新的治療方法，并可能為羅格列酮的抗氧化應(yīng)激作用提供電生理依據(jù)。本研究結(jié)果可能有利于心臟保護藥物的推廣，使心血管病患者，尤其是合并糖尿病的患者從治療中進一步獲益。 方法： 以注射四氧嘧啶(mesoxalylurea)建立家兔糖尿病模型后，個體空腹血糖每次抽查在10mmol/L以上為建模成功。酶解分離獲得高質(zhì)量的健康家兔和糖尿病家兔單個心室肌細胞(即時存活率70％～90％，放置12小時以上仍有存活)。采

5、用膜片鉗全細胞記錄法，分別測定健康家兔組和糖尿病模型家兔組心室肌單細胞在模擬生理條件下、模擬缺血再灌注條件下、羅格列酮干預(yù)的模擬生理條件及模擬缺血再灌注條件下L-型鈣通道電流(L-type Ca current，I<,Ca,L>)數(shù)據(jù)，進行組內(nèi)各實驗條件的對比以及健康組和糖尿病組之間的對比并分析其變化趨勢。 結(jié)果： (一)四氧嘧啶建立糖尿病模型前空腹血糖(7.832±1.506mmol/L)小于建模48小時后空腹血糖(1

6、7.761±7.101mmol/L)、建模前空腹血糖小于建模1周后血糖(20.638±9.003mmol/L)，客觀的證實了四氧嘧啶造模的可行性，48小時及1周后空腹血糖均高于建模前空腹水平亦是本試驗家兔糖尿病的診斷標準。四氧嘧啶所致糖尿病模型各時段胰島素水平(建模前空腹23.454±9.215mmol/L、48小時后22.686±8.939mmol/L 1周后21.651±11.912mmol/L)均未見統(tǒng)計學(xué)差異(各組P>0.05)

7、。 (二)分別記錄封接基線、5min(浸于生理臺式液、缺血臺氏液或其各自與羅格列酮的藥液混合液)后、10min后心室肌細胞I的變化曲線，測量并記錄各組I的電流峰值I<,peak>，以細胞電容標準化后得到各峰值電流相對的電流密度。正常組家兔心室肌細胞I電流密度(-8.618±3.878pA/pF)大于糖尿病組(-7.773±1.805pA/pF)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.207)。給予羅格列酮后

8、正常家兔組(基線-8.826±2.306 pA/pF、05min-4.167±1.886 pA/pF、10min-5.539±1.628pA/pF)，給予羅格列酮后糖尿病家兔組(基線-8.842±1.978 pA/pF、05min-4.966+1.154 pA/pF、10min-3.891±1.064pA/pF)，正常家兔缺血組(基線-8.223±1.553 pA/pF、05min-5.784±1.745pA/pF、10min-3.95

9、8±0.992pA/pF)，糖尿病家兔缺血組(基線-7.223±2.024 pA/pF、05min-6.110±1.621pA/pF、10min-4.775±1.204 pA/pF)，給予羅格列酮后正常家兔缺血組(基線-7.498±1.904 pA/pF、05min-5.944±2.222 pA/pF、10min-5.059+1.947pA/pF)，給予羅格列酮后糖尿病家兔缺血組基線-8.099±1.823pA/pF、05min-6.6

10、34±1.674pA/pF、10min-5.349±1.520pA/pF)心室肌細胞I各時刻差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(各組P<0.05)。 (三)各干預(yù)因素組5min和10min電流密度差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，即給予羅格列酮后正常家兔組、給予羅格列酮后糖尿病家兔組、正常家兔缺血組、糖尿病家兔缺血組、給予羅格列酮后正常家兔缺血組、給予羅格列酮后糖尿病家兔缺血組各組5min和10min電流密度差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論

11、： 1．本實驗中，正常家兔組I電流密度與糖尿病家兔組相似，提示糖尿病對心肌細胞I<,CaL>無明顯影響： 2．干預(yù)因素各組組間I<,CaL>的電流密度無統(tǒng)計學(xué)差異。缺血再灌注與羅格列酮對心室肌細胞I<,CaL>的影響十分相似，提示羅格列酮與缺血再灌注損傷心肌細胞I<,CaL>的影響一致； 3．羅格列酮對心臟的作用不依賴于高血糖存在與否，提示羅格列酮可能通過某些與胰島素水平有關(guān)的特定機制作用于心肌細胞；