連黛片對大腸癌端粒酶活性及hTERTmRNA表達的影響.pdf

1、大腸癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于肺癌和乳腺癌，居第三，病因不明，預后較差，5年存活率不超過40％。在我國，隨著人們生活水平的提高，膳食結構的變化，發(fā)病率有逐年上升趨勢。近幾年來，端粒酶在細胞衰老和癌變過程中的作用日益受到人們的重視，現(xiàn)代研究者普遍認為：端粒酶的激活是腫瘤形成過程中的關鍵步驟。 本項目以連黛片(左金丸加青黛)為受試藥，研究中藥復方在對端粒酶活性、相關基因表達的影響，從分子生物學的角度尋找中藥抑癌可

2、能的新途徑，這對進一步探討中藥抑癌作用機理有重要意義，為今后從更深層次研究中藥抑癌奠定一定的基礎，也為開發(fā)新藥提供了依據(jù)。 1、臨床試驗研究目的：觀察連黛片對非根治性術后或化療后復發(fā)的大腸癌患者的臨床療效及對端粒酶活性及其相關基因hTERTmRNA表達的影響。 研究對象：35例大腸癌患者均來自廣州中醫(yī)藥大學一附院2005.08-2006.08年間門診及住院手術患者，經腸鏡檢查均為非根治性術后或化療后復發(fā)患者。其中20例伴

3、大腸腺瘤性息肉。 研究方法：(1)采用 TRAF—ELISA 法檢測腫瘤組織端粒酶相對活性，熒光定量PCR法檢測腫瘤組織端粒酶hTERTmRNA的表達。觀察35例大腸癌患者腫瘤組織端粒酶相對活性及端粒酶hTERTmRNA的表達。同時比較其與癌旁組織、正常組織、腺瘤性息肉端粒酶相對活性及端粒酶hTERTmRNA的表達的差異。 (2)35例大腸癌患者按照單盲隨機數(shù)字表法分為治療組20例和對照組15例。治療組20例大腸癌患者在

4、不改變對癥支持等常規(guī)用藥基礎上加服連黛片中藥湯劑每次50ml (含黃連6g、吳茱萸1g、青黛3g)，每日兩次。對照組15例大腸癌除不服連黛片外，其他與治療組完全相同。療程1個月，期間不使用與連黛片相類似的其它藥物。分別觀察兩組患者主要臨床癥狀積分的變化、中醫(yī)癥候療效比較；兩組患者腫瘤組織局部端粒酶活性及其相關基因hTERTmRNA表達量的變化。 結果：(1)大腸癌組織中端粒酶活性增強及端粒酶hTERTmRNA的高表達。端粒酶活性

5、及端粒酶hTERTmRNA的表達在正常組織、癌旁組織、腺瘤性息肉、大腸癌組織呈遞增趨勢。其與年齡、性別、大腸癌病變部位及病理類型無關，隨腫瘤組織學分級及臨床分期的增加而呈上升趨勢。 (2)療程結束后，治療組患者癥狀體征較對照組有改善。連黛片組在大便干或爛、腹脹或腹痛、嘔吐或惡心、煩熱口渴等癥狀優(yōu)于對照組，在改善食欲、神疲乏力、口干口苦、納呆等癥狀與對照組相當。在中醫(yī)證候療效方面，20例治療組中顯效為4例，有效為11例，無效為5例

6、；15例對照組的顯效為為1例，有效為4例，無效為10例。療程結束后，腫瘤組織局部端粒酶活性及其相關基因hTERTmRNA 表達量較對照組明顯下降。在熱毒內結和濕熱下注二個證型的患者中，以熱毒內結型中醫(yī)證候療效改善明顯，腫瘤組織局部端粒酶活性及其相關基因hTERTmRNA表達量下降最為明顯。 結論：連黛片能減輕患者臨床癥狀體征，尤其對辯證為熱毒聚于大腸的患者的癥狀改善尤為明顯。可能的機制之一是通過改變與腫瘤密切相關的端粒酶活性及h

7、TERTmRNA 表達量。 2、動物試驗研究 目的：觀察連黛片對實驗性HT29 大腸癌裸鼠移植瘤端粒酶活性及其相關基因hTERTmRNA 表達的影響。 研究方法：采用皮下注射HT29 大腸癌細胞株制作結腸癌裸鼠模型，將皮下移植的裸小鼠隨機分為3組。每組均在初次接種后7天進行灌胃治療，連續(xù)灌胃一月。中藥治療組用連黛片灌胃治療(每只灌胃2g/kg)，西藥治療組用端粒酶抑制劑3’—疊氮3’—脫氧胸腺核苷(疊氮胸苷，AZ

8、T，150mg/kg)灌胃治療，空白對照組予以生理鹽水灌胃。動態(tài)觀察各組裸鼠腫瘤體積變化，用游標卡尺測量每組裸鼠移植瘤的大小。采用TRAP-ELISA 方法檢測腫瘤組織端粒酶活性變化，熒光定量PCR 檢測腫瘤組織端粒酶hTERTmRNA 的表達，結果進行統(tǒng)計學分析。 結果：(1)初次接種后7天各組裸鼠皮下腫瘤大小比較無顯著性差異，并用于下一步的試驗。(2)一個月后治療組裸鼠皮下腫瘤體積比較無明顯差異，兩組治療組裸鼠皮下腫瘤塊大小

9、與空白組比較有差異；(3)空白對照組端粒酶相對活性較兩組治療組明顯增強；空白對照組端粒酶hTERTmRNA的表達增多。中藥組與AZT組端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA的表達改變無顯著性差異。 結論：連黛片能抑制人大腸癌HT29裸小鼠移植瘤的增值，其機制之一可能是減少hTERTmRNA的表達，從而降低腫瘤組織端粒酶的活性。提示中醫(yī)藥防治療大腸癌具有一定優(yōu)勢，深入開展以端粒酶為靶點的中醫(yī)藥治療研究必將為防治大腸癌或其癌前病變開辟